犬猫源尿路致病性大肠杆菌生物学特性初步研究

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尿路感染(urinary tract infections,UTIs)是宠物下泌尿道综合征中常见的一种疾病。其中,尿路感染的常见致病菌是尿路致病性大肠杆菌(uropathogenic E.coli,UPEC)。宠物源UPEC不仅对宠物危害巨大,同时还存在通过宠物感染人的可能。我国对于UPEC的研究还处于初级阶段,研究主要集中在人源UPEC上,而对宠物源UPEC的研究仍比较匮乏,相关的流行病学数据尚不完善。本研究通过对我国台湾和江苏两个地区犬猫源UPEC菌株的药物敏感性、生物被膜表型、种系发生分型、毒力基因和耐药基因进行系统的研究和分析,比较两地区间的差异,为深入研究UPEC的致病机理、耐药机制及防治措施奠定基础。对76株分离自台湾(n=59)和江苏(n=17)的UPEC分离菌株进行药物敏感性试验,结果显示:菌株对大部分抗生素均产生了不同程度的耐药性,其中80.26%的菌株对阿莫西林耐受,72.37%的菌株对美洛西林耐受,且多重耐药率高达75%(57/76),而最敏感的药物为头孢哌酮,敏感率为98.68%。其中台湾地区UPEC分离株,最多对13种抗生素耐受,对阿莫西林耐药率高达81.36%,而对头孢哌酮全部敏感;江苏地区UPEC分离株最多对12种抗生素耐受,对美洛西林、阿莫西林的耐药率高达76.47%,而对头孢哌酮的敏感率约为94.12%。数据分析表明两地区菌株对妥布霉素、丁胺卡那、新霉素、头孢曲松、多西环素、多黏菌素的耐药率均存在显著差异(P<0.05)。通过96孔板半定量测定和显微镜观察来测定76株UPEC菌株的生物被膜表型,结果显示:UPEC菌株的成膜率约76.32%(58/76),以强成膜能力为主,占36.84%。其中台湾地区UPEC分离株的成膜率为71.19%(42/59),且以强成膜能力为主,占33.90%,江苏地区UPEC分离株的成膜率为94.12%(16/17),且以强成膜能力为主,占36.84%。利用PCR方法对来自我国台湾和江苏地区76株犬猫源UPEC菌株的种系发生分型、18种毒力基因、15种耐药基因进行检测和分析。种系发生分型结果显示,UPEC分离株的种系发生分型以B2型(30.26%)和D型(27.63%)居多。其中台湾地区分离株以D型(32.20%)和B2型(27.12%)居多,江苏地区分离株以B2型(41.18%)和A型(35.29%)居多。毒力基因检测结果显示,在受检的18种毒力基因中,UPEC菌株fimH携带率为98.68%(75/76),P菌毛相关基因携带率为31.58%(24/76),papC基因的携带率为25%(19/76),不携带papG alleleI、papG alleleI’及cdtI基因。其中台湾地区UPEC分离菌fim H基因的携带率为98.31%(58/59),其余毒力基因的携带率均低于48%;江苏地区UPEC分离株fim H基因携带率为100%(17/17),其余毒力基因携带率在5%~42%之间。两地区UPEC菌株在毒力基因iut携带率上存在显著差异(P<0.05)。耐药基因检测结果显示,在受检的15种耐药基因中,UPEC菌株sull基因携带率为90.79%(69/76),TEM携带率为69.74%(53/76),不携带CTX-M-2。其中台湾地区菌株sul1基因携带率为93.22%(55/59),不携带CTX-M-2、SHV和armA基因,其余耐药基因的携带率在3%~70%之间;江苏地区sull基因携带率为82.35%(14/17),不携带CTX-M-2,其余耐药基因的携带率在5%~71%之间。两地区UPEC菌株在耐药基因CTX-M-1、SHV和sul3的携带率上存在差异(P<0.05)。统计分析表明:在毒力基因上,B2型UPEC携带毒力基因数量高于A、B1、D型。在种系发生型上,不同种系发生型菌株对papA、papC、papG allele Ⅲ、focA、focG、sfaS、sat、cnfI、hlyD、ieA和iroN基因的携带率不同(P<0.05)。在耐药基因上,B1型UPEC携带耐药基因数量高于A、B2、D型;不同种系发生型菌株对基因SHV、aac3’-Ⅱ和qnrD的携带率不同(P<0.05)。生物被膜表型和耐药基因(aac6’-IB、qnrD、sutetc)存在相关性(P<0.05)。此外台湾地区的生物被膜表型和UPEC菌株对左氧氟沙星、链霉素、多黏菌素的耐药性存在相关性(P<0.05);江苏地区的生物被膜表型和UPEC菌株卡那霉素的耐药性存在相关性(P<0.05)。
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