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目的探究人肝源性干细胞对酒精性脂肪肝保护作用及对刀豆蛋白A诱导急性肝损伤保护作用和机制。方法1.将88只C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、模型组、实验组;模型组和实验组按人肝源性干细胞(HYX1)预处理后注射ConA时间不同又各自分成3小时、6小时、12小时、24小时、48小时组;空白对照组尾静脉注射PBS 200ul/只;模型组每只小鼠尾静脉注射ConA 12mg/kg+PBS 200ul,实验组每只小鼠尾静脉注射ConA 12mg/kg+腹腔移植人肝源性干细胞PBS混悬液200ul(20代);各组于注射ConA 24小时后,取血检测ALT、AST、TBIL;每组肝脏标本HE染色观察病理学改变,并进行肝脏组织学评分。组间比较采用t检验,结果以`x±s表示,P<0.05为差异有统计学意义。2.根据注射刀豆蛋白A后处死小鼠时间点的不同随机将72只C57BL/6小鼠分成0小时、2小时、6小时、12小时、24小时五组,将只进行人肝源性干细胞干预的0小时组作为空白对照,余下每个时间点又分为模型组和干预组,每组8只。检测血清ALT、AST水平;酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清TNF-α水平;肝脏标本HE染色观察病理改变;Tunel染色检测肝细胞凋亡程度;提取肝脏组织RNA,实时荧光定量PCR检测肝组织TNF-α、IL-6基因表达水平。组间分析采用Two-way ANOVA或者独立样本t检验,结果以`x±s表示,P<0.05为差异有统计学意义。3.将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(N)、模型对照组(M)以及人肝源性干细胞移植组(S)。N组以基础饲料喂养,M组和S组以Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养,S组每周进行2次腹腔人肝源性干细胞移植。干预6周后,测定各组小鼠体质量、肝脏指数,检测血清ALT、AST、总胆红素(TBIL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量,检测肝脏中TG和游离脂肪酸(NEFA)含量,并做肝脏病理学检查。结果1.3小时、6小时、12小时、24小时实验组小鼠ALT、AST水平显著低于相对应的模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),48小时模型组和实验组ALT、AST水平无差异(P>0.05);6小时、12小时、24小时实验组小鼠TBIL水平显著低于相对应的模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组中ALT、AST、TBIL均显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);3小时、24小时、48小时实验组ALT、AST显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肝组织标本Ishak评分模型组显著高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.对比相应模型组,12h、24h干预组小鼠肝损伤明显减轻,组织病理学评分显著降低(P<0.05或P<0.01),ALT、AST水平显著下降(P<0.05或P<0.01);2h、6h、12h干预组小鼠血清TNF-α以及2h干预组肝脏TNF-α、IL-6 mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);12h干预组肝脏细胞凋亡数显著减少。3.与M组比较,S组小鼠的血清ALT、AST、TG含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而TBIL、TC、HDL-C的水平有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);肝组织中TG和NEFA含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);肝脏HE染色和油红O染色均显示S组小鼠的肝脏脂肪变性程度较M组明显减轻。结论1.人肝源性干细胞对ConA诱导的急性肝损伤小鼠肝脏具有明显的保护作用,尤其以人肝源性干细胞预处理6小时、12小时保护作用最明显。2.人肝源性干细胞降低TNF-α、IL-6水平和抗肝细胞凋亡的作用可能是人肝源性干细胞抑制ConA诱导小鼠急性肝损伤的重要机制。3.腹腔移植人肝源性干细胞对小鼠酒精性肝损伤具有较好的保护作用。