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烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AfMp1p是一种通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)修饰定位于细胞壁上的蛋白,其细胞壁定位信号位于蛋白质的C端。为了构建里氏木霉(Trichoderma reesei)细胞表面表达系统,我们尝试将AfMp1p的C端细胞壁定位GPI信号肽和烟曲霉几丁质酶AfChiB1的N端信号肽分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的C末端和N末端融合并转化里氏木霉。本文首先从里氏木霉的生长状态、渗透压稳定剂的选择、PEG分子量的选择以及最适PEG浓度和细胞壁消化时间等方面对木霉遗传转化系统进行了优化;随后通过Real-time PCR和蛋白定量,对不同GFP融合蛋白在里氏木霉中不同时期的表达情况进行了研究;最后对里氏木霉表达的不同GFP融合蛋白进行细胞定位研究。荧光观察结合Western blot的结果表明,在平台期中期和后期,带有GPI信号的GFP融合蛋白定位于细胞壁。这些结果表明,烟曲霉来源的GPI信号可以被里氏木霉识别,本论文所构建的表达系统可用于外源蛋白在里氏木霉细胞壁的定位表达。