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目的:支原体是一类缺乏细胞壁的最小原核型微生物。支原体科分为支原体属和脲原体属。2007年前脲原体属分为6个种,其中的解脲脲原体(Ureaplasma.urealyticum,Uu)分为2个生物群:A群(血清2.4.5.7.8.9.10.11.12.13型)和B群(血清1.3.6.14型)。2007年后根据国际细菌学分类学会对柔膜体纲的分类标准正式宣布将Uu中的B群归为一个独立的新种——微小脲原体(Ureaplasma parvum,Up),而A群仍称为Uu。所以现在脲原体属一共包括7个种。因为Up是2007年公布的新种,国内外的研究还很少。Up和Uu是否会致病?它们的感染与临床常见疾病(细菌性阴道病Bacterial Vaginosis,BV)之间是否存在联系?Up和Uu在液体培养基中的生长特性如何?Up和Uu在液体培养基中分解尿素是否存在差异?在固体培养基上Up和Uu的菌落形态是否存在差异?这些生长特性都值得进一步地深入研究。
方法:本实验分成二个部分。第一部分:用2根棉拭子取临床患者阴道分泌物标本,分别接种到固体、液体培养基中。选取固体和液体培养均为阳性的临床株做PCR并对部分标本进行测序。筛选出测序与Up标准株(ATCC700970)相同的Up菌株。与Uu标准株T960(CX8=ATCC27618)各传一代后进行液体培养。每隔固定时间看液体培养基颜色变化、测PH值,并取10ul液体培养基滴种在固体培养基上,记数菌落、观察菌落大小。根据PH变化数值和菌落数绘制出Up、Uu的PH值变化曲线和生长曲线图。观察固体培养基中Up、Uu的菌落大小。第二部分:根据Amsel标准分为BV组(细菌性阴道病Bacterial Vaginosis,BV),非BV组(包括真菌性阴道病,滴虫性阴道病等)和体检组。取阴道分泌物做支原体培养,比较3组支原体感染率,结果经卡方统计,判断Up,Uu和Mh感染与BV的关系。
结果:(1)Uu的生长周期为22h,Up为30h。其中Uu迟缓期比Up快5h,对数期比Up快2h,稳定期比Up快1h。衰退期Uu和Up相同均为8h。Uu的1/2对数期在接种入液体培养基后12h,Up为18h。(2)Uu的液体培养基PH值的变化速度快于Up。Uu在接种入液体培养基13h后PH值达到7.5,此后数值保持不变。而Up为20h。(3)Up和Uu在固体培养基上表现为棕色菌落。大小上可分为大(直径≥25um),中(直径15-24um),小(直径≤14um)三种。在支原体感染与细菌性阴道病的相关性研究中我们发现(1)BV组支原体感染的阳性数高于非BV组和体检组(P＜0.05)。(2)BV组的感染以Mh或Mh+Uu+Up混合感染为主,而非BV组,体检组以单纯Up+Uu感染为主。
结论:(1)Up.Uu的生长规律有明显的不同。(2)Up,Uu的实验室诊断应以固体培养基为基础,显微镜下看到菌落为准。(3)在液体培养基中Uu的传代和保种在12h左右,即1/2对数生长期最好,而Up在18h左右。(4)支原体感染特别是Mh的感染与BV有一定的相关性。