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研究目的本研究利用IgA1分子刺激人肾小球系膜细胞,观察补体C3a、C5a受体拮抗剂(C3aRA、C5aRA)对其增殖及炎症因子IL-6、MCP-1表达的影响,以进一步了解补体参与Ig A肾病的作用机制。研究方法1.利用MTT法检测IgA1在不同浓度及孵育时间对人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖的影响。2.将HMCs分为四组(空白对照组、IgA1组、IgA1+C3aRA组、IgA1+C5aRA组),MTT法检测C3aRA、C5aRA对IgA1刺激的HMCs增殖的影响;荧光定量PCR(RT-q PCR)、Western blot检测各组细胞C3a R、C5a R m RNA及蛋白表达情况。3.将HMCs分为两大组:第一组(空白对照组、C3a组、IgA1+C3a组、IgA1+C3a+C3aRA组)和第二组(空白对照组、C5a组、IgA1+C5a组、IgA1+C5a+C5aRA组),RT-q PCR、Western blot检测各组细胞IL-6、MCP-1 m RNA及蛋白表达情况。研究结果1.MTT结果显示:不同浓度的IgA1对HMCs增殖作用的影响不同,10μg/m L-100mg/m L的IgA1均可以刺激HMCs的增殖,其中以1mg/m L和100μg/m L IgA1对HMCs增殖的刺激作用最强(P<0.001);100μg/m L IgA1刺激HMCs不同时间(6-48h)后其增殖均可出现增强,其中24h时对HMCs增殖的刺激作用最为明显(P<0.001)。2.MTT结果显示:与对照组相比,IgA1组细胞增殖明显增强(P<0.001),而在分别给予C3aRA、C5aRA干预后,C3aRA组和C5aRA组细胞的生长增殖受到一定程度的抑制(P<0.05);RT-q PCR与Western blot结果显示:IgA1上调HMCs C3a R、C5a R m RNA与蛋白表达(P<0.001),而在分别给予C3aRA、C5aRA干预后,HMCs C3a R、C5a R m RNA及蛋白表达明显减少(P<0.05)。3.RT-q PCR与Western blot结果显示:IgA1、C3a、C5a可以刺激HMCs IL-6、MCP-1 m RNA与蛋白的表达,但作用较弱(P<0.05),IgA1与C3a、C5a分别共同作用对HMCs IL-6、MCP-1 m RNA与蛋白表达的刺激作用较强(P<0.05),C3aRA、C5aRA可以减弱IgA1与C3a、C5a对HMCs IL-6、MCP-1 m RNA与蛋白表达的刺激作用(P<0.05)。研究结论1.IgA1可刺激HMCs的增殖,且其增殖作用可被C3aRA、C5aRA部分阻断。2.IgA1刺激HMCs后可上调C3a R、C5a R的表达,C3aRA、C5aRA可降低C3a R、C5a R的表达。3.C3a、C5a可分别与被IgA1刺激HMCs后上调的C3a R、C5a R结合,增加HMCs IL-6、MCP-1表达,C3aRA、C5aRA可减少其表达。