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以pET28a为母核,将pET32a的多克隆位点(multiple cloning site,MCS)替换到pET28a上,构建质粒pSYPU-0.将编码蛋白H的基因克隆到质粒pSYPU-0的Bpull021酶切位点处,构建表达载体pSYPU-1a.将镇痛抗肿瘤肽(Analgesic-antitumor peptide,AGAP)作为表达载体pSYPU-1a的表达模型,构建重组质粒pSYPU-1a-AGAP,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析诱导表达的宿主细胞的上清和沉淀.结果表明外源基因得以表达,但大部分表达产物存在于沉淀中.将蛋白H的基因克隆到质粒pSYPU-0的EcoRI与SacI双酶切位点处,构建表达载体pSYPU-1b.同样以AGAP作为pSYPU-1b的表达模型,构建重组质粒pSYPU-1b-AGAP,同样IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析诱导表达宿主细胞的总蛋白、上清和沉淀.结果表明,AGAP得到可溶性表达, 95％以上的表达产物存在于上清液中.构建的表达载体pSYPU-1b转化BL21(DE3),涂布于LB-Kan琼脂糖平板,挑取单菌落,在连续传116、232、348、464代后,质粒的突变率为0.003％、0.013％、0.017％、0.021％,质粒的丢失率为1.8％、5.0％、9.4％、17.23％.结果表明,pSYPU-1b具有较稳定的遗传性.重组质粒pSYPU-1b-AGAP转化至表达宿主细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达,离心收集菌体细胞,超声破碎后离心得上清,Folin-酚法测得上清总蛋白为120.9mg/L发酵液.上清液经Chealting Sepharose 4B Fast Flow和Q-Sepharose Fast Flow分离纯化,最终每升发酵液得到电泳纯的表达产物2.2mg.