论文部分内容阅读
选题依据:黄芪建中汤出自《金匮要略》用于治疗虚寒性胃痛,临床多用于治疗胃肠道疾病。中药的有效性是其药效成分通过一定的药物传输途径及体内过程最终发挥药效的综合体现,而药代动力学可以对吸收入血潜在有效成分在体内的吸收、分布、代谢和排泄进行研究。课题组前期表征了黄芪建中汤在大鼠血浆中的代谢产物,但血浆中的药物及其代谢产物的含量较少且处于动态变化中,在收集过程中可能会造成某些成分的丢失。尿液、胆汁及粪便等生物样品中的代谢产物与血浆中的基本一致,且易富集,可逆向鉴定被吸收的化学成分,补充血浆代谢产物分析的不足,获得完整的药物体内代谢信息。所以本研究对正常和慢性萎缩性胃炎大鼠口服黄芪建中汤的整合药代动力学进行研究,同时为了更加全面的了解其在体内的代谢过程,对给药后的胆汁、尿液和粪便中的代谢物进行表征并解析其在体内的代谢反应,结合前期血浆代谢研究,全面描述黄芪建中汤的体内代谢情况。目的:建立黄芪建中汤化学成分定量分析方法,并对黄芪建中汤在正常和慢性萎缩性胃炎大鼠的整合药代动力学进行分析,对胆汁、尿液和粪便中代谢物进行全面表征,阐释黄芪建中汤的体内代谢过程,为黄芪建中汤物质基础研究提供科学依据。方法:（1）基于UHPLC-MS/MS对黄芪建中汤18种化学成分快速定量分析:本研究使用质谱多反应监测（MRM）模式建立了可靠的液质联用方法对黄芪建中汤18种成分进行定量分析,为其质量控制奠定基础。（2）黄芪建中汤在正常和慢性萎缩性胃炎大鼠的整合药代动力学研究:本研究首先使用液质联用技术建立了黄芪建中汤12种成分和1种代谢物的体内定量分析方法,然后将SD大鼠分组造模后灌胃给予高剂量黄芪建中汤后,采集多时间点下血浆样本,经乙腈沉淀蛋白等预处理后,分析获得具体成分浓度,使用DAS 2.0软件对正常和慢性萎缩性胃炎大鼠进行药代动力学分析,然后模型整合进行整合药代动力学研究,比较了黄芪建中汤在正常和慢性萎缩性胃炎大鼠体内的药代动力学差异。（3）基于UHPLC-Q-Exactive MS的黄芪建中汤在大鼠胆汁、尿液和粪便代谢研究:将SD大鼠灌胃给予高剂量黄芪建中汤后,采集胆汁、尿液和粪便样本,经Alltech C18固相萃取（SPE）柱处理后,使用UHPLC-Q-Exactive MS采集数据,将其导入Compound discover 3.0软件,获得精确分子质量数以及推测反应类型,使用Xcalibur3.2软件提取图谱中特征碎片离子与数据库比对并进行裂解规律分析,对胆汁、尿液和粪便中成分及代谢产物进行初步鉴定。结果:（1）黄芪建中汤18种成分定量分析:对黄芪建中汤中18种成分进行了定量分析,并用于分析实验室制备复方和市场购买的黄芪建中丸样本,显示所建方法可行,为黄芪建中汤的全面质量控制提供依据。（2）正常和慢性萎缩性胃炎大鼠的整合药代动力学研究:对黄芪建中汤12种成分和1种代谢物进行整合药代动力学分析,同时也比较了正常和慢性萎缩性胃炎大鼠的药代动力学差异,结果显示在慢性萎缩性胃炎状态下黄酮类和黄酮苷类的AUC（0-t）、AUC（0-∞）和Cmax均减少且T1/2和MRT（0-t）显著增长,推测黄芪建中汤在病理状态下吸收减少体内停留时间加长。（3）基于UHPLC-Q-Exactive MS的黄芪建中汤大鼠胆汁、尿液和粪便代谢研究:对黄芪建中汤灌胃给药后的大鼠胆汁、尿液和粪便中代谢物及代谢过程进行初步研究。结果显示,胆汁中鉴定了94个成分,包括6个原型和88个代谢物。尿液中发现并鉴定出89个成分,包括21个原型和68个代谢物。同时,在粪便中也鉴定出89个成分,其中22种为原型,67种为代谢物。其中,原型成分主要为黄酮类及相关苷类、五环三萜皂苷类和单萜类等。它们的生物转化反应方法主要包括氧化、水解、还原、甲基化、乙酰化、硫酸化和结合反应（葡糖醛酸、葡萄糖和甘氨酸结合）。结论:本研究基于液质联用技术对黄芪建中汤体外化学成分进行定量分析并对黄芪建中汤在正常与疾病大鼠的药代动力学进行比较分析,此外对给药后大鼠胆汁、尿液和粪便的代谢物进行表征,得到较全面的黄芪建中汤体内代谢谱。本研究为明确黄芪建中汤的体内代谢特征以及体内作用过程提供了依据,也为后期黄芪建中汤的质量控制及防治慢性萎缩性胃炎临床研究参考依据。