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杆状病毒是一类有囊膜包被的双链环状DNA病毒。其基因表达具有时序性,按照转录先后分为早期、晚期和极晚期表达。瞬时表达实验结果显示,杆状病毒早期基因表达依赖宿主RNA聚合酶；晚期表达依赖病毒自身编码的RNA聚合酶。病毒RNA聚合酶由LEF4、LEF8、LEF9和P47四个亚基组成。本文研究了病毒RNA聚合酶亚基基因缺失对杆状病毒复制和晚期基因表达的影响。1.利用λ-Red同源重组系统从苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedro virus)基因组分别敲除lef4、lef8、lef9和p47基因,再借助Bac-to-Bac系统,分别在突变体和野生型bacmid中插入增强型绿色荧光蛋白基因egfp构建对应的单个基因缺失和野生报告型bacmids。2.用包含早期表达报告基因的lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生bacmids分别转染Sf9细胞,在荧光显微镜下监测荧光蛋白的表达。实验结果显示,在四种单个基因缺失和野生报告型bacmids转染的Sf9细胞培养皿中都可以见到荧光细胞。用被转染细胞培养上清液接种新鲜Sf9细胞培养,只有野生型bacmid转染上清液接种的培养皿中出现荧光细胞；而在四种单个基因缺失突变体转染上清液接种的培养皿中都未观察到荧光细胞。这些现象表明,lef4、lef8、lef9和p47基因是病毒复制必需基因；这些基因的缺失导致无感染性芽殖型病毒体产生3.用包含晚期表达egfp的left、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生bacmids分别转染Sf9细胞,在荧光显微镜下监测荧光蛋白的表达。实验结果显示,在野生报告型bacmids转染的Sf9细胞培养皿中可见大量荧光细胞；而在四种单个基因缺失突变体转染培养皿中只见少量荧光细胞。用包含晚期表达的荧光素酶基因luc的lef4、lef8、leJ9或p47基因缺失突变体以及野生型bacmids分别转染Sf9细胞,定量检测被转染细胞抽提物的荧光素酶活性。实验结果显示,lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体表达的荧光素酶水平相较于野生bacmid分别下降99.79%、99.89%、99.87%和99.97%。这些实验结果表明,lef4、lef8、lef9或p47基因缺失导致晚期基因表达大部分丧失,但未完全丧失。4.在用lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生型bacmids分别转染的Sf9细胞培养中分别加入DNA聚合酶抑制剂阿菲迪霉素或RNA聚合酶抑制剂α-鹅膏覃碱,定量检测被转染细胞抽提物的荧光素酶活性。实验结果显示,添加阿菲迪霉素使野生型和lef4、lef8、lef9、p47基因缺失突变体的荧光素酶表达量下降98.64%-99.96%。添加RNA聚合酶抑制剂α-鹅膏覃碱对各个基因缺失突变体表达荧光素酶活性水平无显著影响。