中药半枝莲化学成分及质量评价方法研究

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半枝莲是唇形科植物半枝莲(Scutellaria barbarta D.Don)的干燥全草,别名有并头草、狭叶韩信草、牙刷草等,据药典记载,半枝莲性寒,味辛、苦,归肺、肝、肾经,有清热解毒,化瘀利尿的功能,主要用于治疗疔疮肿毒,咽喉肿痛,跌扑伤痛,水肿,黄疸以及蛇虫咬伤。目前从半枝莲中分离纯化出二百多种化学成分,包括有黄酮以及黄酮苷类、二氢黄酮及二氢黄酮苷类、二萜类、多糖和甾体类化合物。为深入研究半枝莲的药效物质基础,本文对半枝莲的化学成分进行提取分离纯化研究,并将分离得到的单体化合物作为半枝莲化学成分表征的对照品。通过超高效液相色谱/离子淌度–四极杆飞行时间质谱(UPLC/IM–QTOF–MS)技术对半枝莲的化学成分进行表征,为阐明半枝莲的物质基础提供依据。以从半枝莲中分离得到的化合物野黄芩素、野黄芩苷、柚皮素、芹菜素和高车前素作为指标物质,通过UPLC–UV技术对不同产地的半枝莲药材进行质量控制研究,为评价半枝莲药材的质量提供依据。本论文主要包括以下三个部分:1半枝莲化学成分分离鉴定采用ODS、硅胶、Sephadex LH–20、制备型高效液相等色谱方法,对半枝莲提取物进行进一步分离纯化,通过UV、LC–MS、NMR等波谱技术共鉴定了15个化合物,分别为5,7,4’–三羟基–8–甲氧基黄酮、高车前素、柚皮素、芹菜素、野黄芩素、野黄芩苷、3–表齐墩果酸、齐墩果酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、丁香树脂素–4–O–β–D–葡萄糖苷、金色酰胺醇酯、丁香酸、4–(4’–羟基苯基)–丁–3–烯–2–酮、4–烯丙基–2,6–二甲氧基苯基葡萄糖苷。丰富了半枝莲的化学成分,为它的进一步开发利用提供理论基础。2基于液质联用技术的半枝莲化学成分表征采用超高效液相色谱/离子淌度–四极杆飞行时间质谱(UPLC/IM–QTOF–MS)技术对半枝莲进行定性分析,在系统整理半枝莲植化分离文献的基础上建立了“半枝莲自建数据库”,共记录197个已知半枝莲化学成分的结构信息(名称、分子式、化学结构),将该数据库导入UNIFITM软件,建立了基于UNIFI自动注解HDMSE数据的高效代谢物鉴定流程(包括分析方法设置、数据采集、数据校正、数据处理与鉴定),通过小分子预测、MS1/MS2数据与数据库成分理论质谱信息匹配,大大缩短分析时间,并呈现可重现的鉴定结果,利用该方法对半枝莲中的主要成分进行结构鉴定,共推测了93个化合物,主要包括黄酮类化合物30个、二萜类57个,三萜类2个以及其他类4个,通过与实验一中分离得到的化合物对比,确证了12个成分,为明确半枝莲中的主要成分提供依据。3半枝莲的质量评价实验一对半枝莲的化学成分进行提取分离,得到野黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、芹菜素和高车前素五个化合物,研究报道,野黄芩苷、芹菜素对人卵巢癌SKOV3细胞有明显的抑制作用;野黄芩素对人肝癌细胞(Hep3B)、人胃癌细胞(AGS)、人肺癌细胞(A549)、小鼠黑色素瘤细胞(B16)和小鼠乳腺癌细胞(4T1)均有明显的抑制作用;高车前素有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等;柚皮素和柚皮苷对呼吸系统有明显的药理作用,如镇咳、祛痰和抗肺部炎症等,因其良好的药理活性,确定这五个化合物为半枝莲药材质量评价的指标物质。利用UPLC–UV技术对半枝莲药材中的这五个指标成分进行含量测定,方法学考察结果表明:线性关系的r值大于0.9991;日内精密度的RSD值小于1.49%;稳定性的RSD值小于等于2.09%;重复性的RSD值小于等于2.17%;加样回收率分别为104%、102%、96%、104%和99%,表明方法的精密度高、重现性好、灵敏度高,可用于半枝莲药材的质量控制研究。采用UPLC–UV技术对16批不同产地的半枝莲药材进行分析,将得到的色谱数据导入中药指纹图谱相似度评价系统建立指纹图谱,分别以得到的16批不同产地半枝莲药材的20个共有峰和以实验一中分离得到的五个化合物的峰面积为变量进行分析,使用SIMCA14.1软件对其进行主成分分析和聚类分析。根据聚类分析的结果,可将16批次的药材分成三类,A类、B类和C类,A类样品的总峰面积明显高于B类样品,C类样品的总峰面积最差。统计学分析结果表明,与标准药材相比较,16批不同产地的药材中除了C类样品外,其余产地的药材的总峰面积均高于标准药材。综上,本文对半枝莲药材的化学成分进行了提取分离、结构鉴定和全成分推测,对不同产地半枝莲药材进行了质量评价,最终建立了16批不同产地半枝莲药材的质量评价方法,为多指标评价半枝莲药材质量提供了参考,有助于推动半枝莲药材的进一步发展。
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