河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是一种小分子量海洋神经毒素,主要存在于河豚鱼体内,特别是在卵巢和肝脏中。虽然河豚鱼味道鲜美,但是TTX是毒性极强,它能够与细胞膜表面的Na+通道受体结合,阻碍神经和肌肉的传导,从而导致神经麻痹、呼吸衰竭,甚至引起死亡。在国内外的沿海地区,由于食用河豚鱼而引起中毒的事例也频繁发生,因此对TTX的定量分析的研究非常重要。目前,对TTX检测的传统方法和各种仪器分析法,由于检测时间长、灵敏度差或是样品处理复杂、成本高等原因,而限制了它们的应用和推广。本研究以建立一种快速有效的检测方法为·目的,制备高亲和力、高特异性的TTX单克隆抗体。本实验以钥孔戚血蓝素(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)与TTX的偶联产物分别作为制备抗体的免疫抗原和检测抗原。通过动物免疫,获得高效价的TTX抗血清,最敏感的小鼠效价达到1：32000。通过优化基于TTX多克隆抗体建立的间接竞争ELISA方法的条件,确定ELISA最佳工作条件为：包被原TTX-BSA最佳工作浓度为0.25μg/mL;抗血清最佳稀释度为1：32000；酶标二抗(HRP-IgG)的最佳稀释度1：10000。以优化条件建立ELISA标准曲线的检测线性范围为83～1906 ng/mL,最低检出限为82.15 ng/mL。批间和批内变异系数均小于9%,样品回收率为83.034%～100.296%。通过细胞融合与首创的快速筛选方法,大大缩短细胞克隆化时间,获得5株稳定分泌的单克隆细胞株,分别命名为1D3、2E12、5B9、5E5和6F9,其中1D3亚型为IgG3,其他的都属于IgG1。5B9单克隆细胞株经过扩大培养,体内诱生腹水。采用辛酸-硫酸铵法纯化获得较纯的IgG抗体,其蛋白浓度为4.66 mg/ mL,效价为1：16000,亲和力为2.55×109L/mol,属于高亲和力抗体。本研究获得的单克隆抗体为TTX的快速检测方法奠定了基础,可用于制备基于单克隆抗体的ELISA检查试剂盒、胶体金快速检测试剂条和免疫传感器法等。