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研究背景:猴头菇Hericium erinaceus是一种经典的药食两用真菌,在我国很早便进入人们饮食生活,不仅因为其珍贵和味道鲜美,并且中医认为它有利五脏、助消化、滋补身体的功效。随着对野生猴头菌的驯化和人工栽培,对猴头菇中有效成分的研究越来越多,其中多糖以其含量高、毒副作用少,活性多糖,受到了广泛关注。据报道猴头菇多糖具有抗肿瘤和调节免疫、保护胃肠道黏膜、保护神经细胞并促进其再发育、降血脂降血糖等多种生物活性,而其中以β-(1→3)和β-(1→6)连接的葡聚糖具有显著的抗肿瘤和免疫调节作用。然而,猴头菇来源和制备方法不同,得到的猴头菇多糖纯度、结构差异巨大,并且普遍缺乏深入的序列结构研究,这极大限制了猴头菇多糖构效关系的理解和临床应用。目的:优化工艺制备高纯度猴头菇β葡聚糖,并对其序列结构展开深入研究。方法:(1)采用单因素法优化纯化过程中木瓜蛋白酶酶解条件,截留的分子量大小,除色素方法以及色谱分离条件等;(2)通过1D的1H NMR、13C NMR和2D的1H-1H COSY、HSQC谱图,甲基化,高效分子排阻色谱串联多角度激光散射和示差折光检测器初步确定制得的多糖组分糖苷键种类,端基构型和分子量大小及分布;(3)将HPAEC-PAD和Q-TOF-MS/MS连用,高效地在线分离分析葡聚糖组分酶解的寡糖序列,并据此推断多糖糖链序列结构。结果:(1)制备得到四个多糖组分:HEP1～HEP4;(2)HEP1和HEP2中岩藻糖和半乳糖是α构型,葡萄糖为β构型,HEP3和HEP4为β葡聚糖。其中岩藻糖以端基形式存在,半乳糖主要有1,6和1,2,6连接,且以α-1,6-Ga1为主链,在O-2位具有较低支链度,葡萄糖以1,6连接为主,O-3位存在大量支链。(3)序列研究结果显示HEP3酶解产物中有不同大小的寡糖,相同大小的寡糖存在不同连接方式。大部分1→6连接片段被酶解后,剩余寡糖碎片均由较短的2～3个1→6连接葡萄糖链通过1→3键相连接而成。这些碎片就像是一种类网状结构的葡聚糖,被酶解后的产物。可以想象这种类似网状的葡聚糖以β-1,6-Glc连接为主链,在不同残基的O-3位通过1～2个β-1,3-G1c相连接而成,且半定量分析结果显示平均每6个1→6连接葡萄糖残基就有一个1→3葡糖糖残基。结论:本课题建立了制备纯度较高的猴头菇多糖的工艺流程,并对不同组分的结构进行详细的鉴定,尤其是建立了 HPAEC-PAD和Q-TOF-MS/MS连用的方法解析猴头菇β葡聚糖的序列信息,为猴头菇中β葡聚糖这一有显著生物活性的组分在以后的药理研究中打下了坚实的结构基础。