白藜芦醇对体外培养肠球菌抗菌活性研究

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目的:肠球菌为院内感染的重要病原菌,不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染,还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎,由于其固有耐药性和第一株耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-resistantenterococci,VRE)出现,感染率逐年增加,引起临床的高度重视,因其对多种抗生素耐药成为是治疗的一大难题。从20世纪50年代起我国医药工作者开始了对中药抑菌作用的与抑茵成分的研究,由于中药抗菌的特殊机理,不易产生耐药性,逐步成为研究的热点。白藜芦醇(Resveratrol,RES)为多酚类物质,是一种植物抗毒素,广泛存在于自然界的种子和植物中,有许多是常见的药用和食用植物,如虎杖、花生、葡萄等。白藜芦醇具有多种生物活性,包括抗氧化活性、抗炎症、雌激素样活性、生长抑制活性、免疫调节、化学预防、抗肿瘤以及抗菌作用。但关于白藜芦醇抗菌研究报道甚少,对多种细菌的作用效果和机制不明确。近年来的多项试验研究表明,它作为一种几乎无毒副作用且来源广泛的天然植物提取物,具有潜在的临床应用价值。本研究拟应用最低抑菌浓度(MinimalInhibitory Concentrations,MIC)检测方法,观察白藜芦醇对肠球菌是否具有抑制作用,进一步白藜芦醇的抑菌机理进行阐述,为中药抗菌在临床防治细菌感染提供理论依据。   方法:根据美国临床实验室标准化委员会(Clinical and LaboratoryStandards Institute,CLSI)标准M7-A5,使用微量肉汤稀释法对白藜芦醇进行定量抗菌实验,获得白藜芦醇对粪肠球菌和屎肠球菌的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentrations,MIC),同时应用扫描电镜和透射电镜观察白藜芦醇对肠球菌细胞作用后微观结构的变化。   结果:白藜芦醇对粪肠球菌MIC50和MIC90分别为0.256mg/mL、0.512mg/mL,对屎肠球菌的MIC50和MIC90分别为0.256mg/mL、0.512mg/mL。通过扫描电镜观察白藜芦醇对肠球菌形态超微结构的影响,可以观察到正常肠球菌的扫描电镜结果显示菌体细胞外形是大小相对一致。正常肠球菌的透射电镜显示菌体细胞结构清晰可见,细胞壁边缘光滑,菌体的外膜、细胞壁、胞浆膜等均清晰可见。而经0.256 mg/mL白藜芦醇作用后的肠球菌扫描电镜显示肠球菌形态出现不规则,大小很不一致,细胞壁出现皱褶,周围多刺状突起,有部分菌体细胞成倍拉长或发生破裂;通过透射电镜观察白藜芦醇作用后肠球菌的透射电镜超薄切片显示菌体细胞结构明显被破坏,细胞与细胞间的界限变模糊,壁层次不清,细胞器结构模糊,细胞质内含物大多消失,出现大量空泡。证实了白藜芦醇对肠球菌的破坏作用,表明白藜芦醇对肠球菌具有很好的抗菌作用。   结论:白藜芦醇对屎肠球菌和粪肠球菌均有明显的抑制作用。通过实验我们可以初步推断白藜芦醇对肠球菌的抑菌作用是通过干扰细胞壁的合成,菌体细胞结构造成破坏,使菌体扭曲变形,致使细胞破裂,释放胞内成分,直至成为空壳或分解。即与青霉素结合蛋白结合或者阻碍细胞壁的肽糖聚合所需的糖肽基和转肽反应,使细胞壁合成受阻;或者同时干扰细胞膜蛋白质的合成并改变膜结构的完整性,当药物通过破损的细胞膜进入菌体后,继而干扰菌体内物质的合成,妨碍细菌DNA复制、转录等,影响菌体生长代谢,抑或这两种机制协同作用。白藜芦醇对肠球菌的体外抑菌试验,结果表明白藜芦醇是一种具有极其广阔前景的抗感染中药。  
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