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桃褐腐病(peach brown rot)是桃生产上最重要的病害之一,能够造成严重的产量损失。为明确我国不同桃产区褐腐病菌的种类及多样性和主要致病因素,本研究对我国不同桃产区褐腐病菌进行了鉴定和遗传多样性分析,并测定了不同产区来源分离株的致病性和胞壁降解酶活性,同时对主要致病因子多聚半乳糖醛酸酶基因PG1进行了克隆和表达分析,以探明不同产区桃褐腐病菌致病机制和差异,为不同产区桃褐腐病的防控提供理论基础。从我国12个省(市、自治区)共14个不同产区的桃褐腐病病果上分离获得23株桃褐腐病菌分离株。各分离株的PDA平板菌落形态略有差异,但来自云南的分离株hfyn与其他分离株明显不同。根据rDNA-ITS序列将云南分离株hfyn鉴定为云南丛梗孢(Monilia yunnanensis),而其余22株分离株均鉴定为果生从梗孢(M fucticola)。多对特异性引物PCR以及多重PCR扩增分析也确证了上述鉴定结果。SNP单核苷酸多态性、RAPD和ISSR分子标记的遗传多样性分析表明,除鉴定为云南丛梗孢(M yunnanensis)的分离株hfyn与其他分离株亲缘关系最远以外,浙江丽水分离株hfz1-3也在进化树上聚在较远的分支。进一步聚类分析发现同一地区或是地理位置距离较近的分离株大多数可以在进化树上被聚为同一分支,但也存在同一地区分离株不在同一分支的现象。致病性分析表明,不同产区来源的桃褐腐病菌在桃果上的致病力存在差异,其中来自浙江丽水、河北石家庄、山东青岛以及江苏溧水等地的分离株致病力较强,而来自山东泰安、云南昆明和上海庄行的分离株致病力相对较弱。这些分离株在桃果上的致病性和产孢能力明显强于苹果,但都不侵染非寄主番茄。胞壁降解酶酶的活性测定结果表明各分离株均能产生4种不同的胞壁降解酶,其中多聚半乳糖醛酸酶(PG)和聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)总体上活性最高,活性最高的分离株分别达到了 357.601 U/mL和342.066 U/mL。而纤维素酶(Cx)以及β-葡萄糖苷酶(β-GC)的活性总体上水平较低,活性最高的分离株也分别仅有21.869 U/mL和23.378 U/mL。此外,提取的粗酶液对桃叶片有一定的致病作用,能够使叶片软化,褪绿变黄,丧失韧性。通过PG1基因序列比对,桃褐腐病菌各分离株存在1～50 bp的碱基差异。除云南分离株hfyn以外,致病力最强的分离株hffj-1的PG1基因序列与其他分离株差异最大,在进化树上也被聚在较远的分支。选取致病性中等的分离株hfhs-3进行PG基因的克隆与表达,生物信息学分析表明其PG1基因全长为1095bp,编码的蛋白含有365个氨基酸残基,分子量为36.77 kDa,pI值为8.55;蛋白质N-端具有信号肽序列,位置在1-20 AA处。截掉1-20AA(信号肽)后,利用IPTG对重组菌产物进行诱导表达,SDS-PAGE电泳在36.7kDa处检测到有条带,与预测的结果相一致,表明PG1基因可以在大肠杆菌中异源表达。Western blot印记杂交实验验证了该条带。经包涵体变性复性之后得到的原核表达纯蛋白,检测不到PG活性。