创伤性神经瘤组织微粒构建的组织工程神经移植物原位修复神经缺损的研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fanjun6699
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目的:组织工程神经移植物作为一种有替代自体神经移植潜力的方法,目前广泛用于周围神经缺损修复的研究。组织工程神经支架的核心因素通常包括:理想的种子细胞、物理支架材料、神经营养因子及细胞外基质。本研究以创伤性神经瘤组织为基础,将其与壳聚糖套管复合构建一种新型的组织工程神经移植物,用于原位修复神经瘤切除所遗留神经缺损(10mm),并评价其修复效果。方法:(1)通过SD大鼠坐骨神经单纯横断、近侧断端结扎的方法构建创伤性神经瘤模型,借助超声弹性成像、免疫组织化学染色等实验方法验证模型的有效性,明确神经瘤组织的成分。(2)通过体外实验,将神经瘤组织与雪旺细胞(SCs)、背根神经节(DRG)分别共培养,借助免疫荧光染色、CCK8、ELISA等实验方法评价雪旺细胞增殖、分泌及背根神经节轴突生长的影响。(3)通过动物体内实验,以神经瘤组织微粒为基础,通过与壳聚糖套管复合构建组织工程神经移植物,并将其用于原位修复神经瘤切除所遗留神经缺损(10mm)。实验动物随机分为三组:Neuroma组(填充神经瘤微粒的壳聚糖导管组,n=10)、Hollow组(单纯壳聚糖导管组,n=10),Sham组(假手术组,n=10)。术后通过组织学、形态学、电生理等检测方法评价其对大鼠坐骨神经缺损的修复效果。结果:(1)构建创伤性神经瘤模型术后3周,通过超声检测及术后大体观可见神经近侧断端形成典型球根状结构;组织学染色可见该结构内部正常神经纤维结构破坏明显,排列杂乱无章,内部包含大量雪旺细胞及层粘连蛋白(laminin)、纤维连接蛋白(fibronectin),提示模型构建成功。(2)体外共培养结果表明神经瘤组织可以显著(p<0.05)加快DRG轴突生长及促进雪旺细胞的增殖和分泌。(3)动物体内原位修复术后2周移植物纵切组织学染色结果显示Neuroma组再生神经纤维生长速度优于空管组;术后12周Neuroma组神经电生理、再生神经组织学及靶器官恢复情况等评价结果均优于空管组,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:(1)通过坐骨神经单纯横断、近侧断端结扎的方法成功构建了创伤性神经瘤模型;(2)验证了神经瘤组织含有大量雪旺细胞、神经组织来源的细胞外基质成分及神经营养因子;(3)由神经瘤组织微粒构建的组织工程神经移植物能够有效用于原位修复神经瘤切除所遗留的神经缺损。
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