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本论文通过电子克隆的方法克隆得到两个稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的钙/钙调素依赖蛋白激酶(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase CaMK)基因,分别命名为MgCaMK1和MgCaMK2。序列特征分析表明MgCaMK1和MgCaMK2与已知丝状真菌CaMK氨基酸序列具较高的相似性,且具CaM结合位点。随后,采用原核表达技术对MgCaMK1和MgCaMK2基因的表达条件、产物激酶特性进行了研究,具体结果如下:1.采用电子克隆的策略得到了两个稻瘟病菌CaMK基因,分别命名为MgCaMK1和MgCaMK2。GeneBank提交序列号为:MgCaMK1:EU 545466;MgCaMK2:EU545467。MgCaMK1基因长度为1221bp,包含5个内含子,编码406个氨基酸,分子量大小为45.6KDa:MgCaMK2基因长度为1260bp,包含1个内含子,编码419个氨基酸,分子量大小为45.7KDa。氨基酸序列分析发现,MgCaMK1与脉孢菌(Neurospora crassa)和申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)的CaMK相似性最高,达到76%;MgCaMK2与棒曲霉(Aspergillus clavatus)的CaMK相似性最高,达到88%。进化树分析表明MgCaMK1和MgCaMK2与其它物种的CaMK有着较近的亲缘关系。2.利用MgCaMK1和MgCaMK2基因的部分序列做探针进行Southern blot分析,结果表明,MgCaMK1和MgCaMK2在稻瘟病菌基因组中都是单拷贝基因。3.利用酵母表达系统对MgCaMK1和MgCaMK2进行真核表达研究未得到目标表达产物。随后,将MgCaMK1和MgCaMK2基因连接到原核表达载体pET32a(+)进行表达研究。确定的优化表达条件为:诱导温度为15℃,诱导时间为20h,IPTG浓度为1.0mM(Trx-CaMK1)和0.8mM(Trx-CaMK2)。表达后得到的可溶性Trx-MgCaMK1融合蛋白的比例为64.8%;可溶性Trx-MgCaMK2融合蛋白的比例为39.1%。4.利用纯化后的Trx-MgCaMK1和Trx-MgCaMK2融合蛋白以及本实验室表达纯化的稻瘟病菌钙调素(CaM)做材料,以HistoneⅢ-s作为底物对表达后的CaMK的Ca2+/CaM依赖特性及激酶活性进行了研究。结果表明,MgCaMK1具激酶活性,其自身磷酸化和底物磷酸化活性都依赖于Ca2+和CaM,是CaMK家族的一员。MgCaMK2也具激酶活性,但其自身磷酸化和底物磷酸化活性活性只依赖于Ca2+,而不依赖于CaM,初步判断MgCaMK2属于一种Ca2+-依赖性的蛋白激酶。