[目的]将普洱茶与滇红茶(红茶)、龙井(绿茶)、铁观音进行比较,以茶氨酸、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及咖啡因作为茶叶中抗疲劳成分及功能成分指标,以小鼠抗疲劳经典实验为动物试验指标对普洱茶的抗疲劳效果进行了深入的研究,并比较了随储存年代,普洱茶抗疲劳效果的变化,为普洱茶的保健价值的评定提供了依据。建立了茶叶中未衍生化高效液相色谱法测定茶氨酸含量及非梯度洗脱的HPLC分析方法测定EGCG及咖啡因含量的方法,为茶叶中抗疲劳有效成分的研究提供了可行的分析方法。[方法]1.茶叶中茶氨酸、EGCG及咖啡因的测定方法1.1茶氨酸、EGCG和咖啡因的提取方法茶叶样品粉碎过80目筛,茶叶中的茶氨酸以水提取,超声30min,温度设定70℃,提取2次。EGCG及咖啡因以50%的乙醇超声提取30min,温度设定70℃,提取2次。1.2色谱条件采用Inertsil ODS-C18柱(5μm,4.6×250mm),HPLC-DAD方法进行测定,流速为1.0ml/min.测定茶氨酸为50%乙腈-0.1%磷酸(pH为2.5)(5：95,v/v),测定EGCG及咖啡因为甲醇-1.5×10-4 mol/L KH2PO4溶液(磷酸调pH为3)(25：75,v/v)；2.2008年产滇红茶、龙井(绿茶)、铁观音及普洱茶抗疲劳功效的比较研究健康雄性小鼠200只,18-22g,分成四批进行试验,每批随机分为5组,4个实验组和1个对照组,剂量根据预试验确定为1.34g/kg·bw.每组10只,分别灌胃给予滇红茶、龙井、铁观音、2008年普洱茶样品处理液,对照组给予蒸馏水；30d后实验一批进行负重游泳实验,实验二批进行血清尿素氮测定,实验三批进行肝糖元和肝组织中铜、锌、铁(Cu、Zn、Fe)元素的测定,实验四批进行血乳酸值测定。3.1996年、2000年、2004年、2008年四个不同贮藏年份普洱茶抗疲劳功效的比较研究健康雄性小鼠100只,18-22g,分成两批进行试验,每批随机分为5组,4个实验组和1个对照组,剂量为1.34g/kg·bw。每组10只,分别灌胃给予1996年、2000年、2004年、2008年普洱茶样品处理液,对照组给予蒸馏水；30d后实验一批进行负重游泳实验,实验二批进行血清尿素氮测定。[结果]1.茶叶中茶氨酸、EGCG及咖啡因含量的测定结果三种成分在10～300μ/ml浓度范围内,各组分峰面积与相应浓度均呈良好线性关系,r>0.999。各组分的加标回收率在87%-102%之间,方法精密度相对标准偏差在0.42%～5.87%之间。滇红茶、龙井、铁观音的茶氨酸含量分别为：5.11±0.21、14.43±0.65、5.93±0.32 mg/g；1996年、2000年、2004年、2008年普洱茶的茶氨酸含量分别为：3.86±0.15、2.55±0.17、6.10±0.11、9.76±0.21mg/g；滇红茶、龙井、铁观音的EGCG含量分别为：13.41±2.35、64.60±3.38、49.85±7.76 mg/g；1996年、2000年、2004年、2008年普洱茶的EGCG含量分别为：36.88±5.66、28.82±4.07、41.80±5.40、51.79±6.30 mg/g；滇红茶、龙井、铁观音的咖啡因含量分别为：27.72±0.67、24.19±2.21、18.28±0.36 mg/g；1996年、2000年、2004年、2008年普洱茶的咖啡因含量分别为：27.75±1.10、29.48±2.74、24.58±0.61、27.11±0.92mg/g。2.2008年产滇红茶、龙井、铁观音及普洱茶抗疲劳功效的比较结果四个实验组与对照组比较,其中红茶组以滇红茶为代表,绿茶组以龙井为代表；经比较,红茶组小鼠的游泳时间与对照组差异无统计学意义(P>0.05),其余三个实验组的负重游泳时间均高于对照组(P<0.05),时间的长短顺序为：绿茶组>铁观音组>2008普洱组>红茶组；四个实验组的血清尿素氮含量均低于对照组(P<0.05),其中绿茶组的血清尿素氮水平最低,其余三个实验组的血清尿素氮水平间差异无统计学意义(P>0.05)；红茶组小鼠的肝糖元含量与对照组差异无统计学意义(P>0.05),其余三个实验组的肝糖元含量均高于对照组,高低顺序为：2008普洱组>绿茶组>铁观音组>红茶组；四个实验组与对照组所取肝脏组织的Cu, Fe, Zn的含量差别均无统计学意义(P>0.05),四个实验组所取肝脏组织Cu, Fe, Zn的含量间差别也无统计学意义(P>0.05)；绿茶组与对照组的血乳酸曲线下面积差异有统计学意义(P<0.05),其血乳酸曲线下面积低于对照组,其余三个实验组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。3.1996年、2000年、2004年、2008年四个不同贮藏年份普洱茶抗疲劳功效的比较结果与对照组比较,四个年份的普洱茶组均能延长小鼠游泳时间(P<0.05),不同年份茶叶之间的差别无统计学意义(P>0.05)；与对照组比较,四个实验组均能降低小鼠运动后血清尿素氮水平(P<0.05)。其中1996年组的血清尿素氮水平高于2004年组和2008年组(P<0.05)；2000年组的血清尿素氮水平高于2008年组(P<0.05)。【结论】1.本文所测四种茶叶中,总体上龙井(绿茶)的茶氨酸、EGCG、咖啡因含量最多,2008普洱茶成分含量低于龙井(绿茶),铁观音居中,滇红茶(红茶)最低；根据2003年颁布的《保健食品检验与评价技术规范》,通过负重游泳实验、血清尿素氮实验、肝糖元测定、血乳酸测定四项抗疲劳指标,在所确定的同一实验剂量(1.34g/kg·bw)下,2008年产龙井(绿茶)、铁观音、普洱茶都有抗疲劳功效,其中龙井的抗疲劳功效最佳,滇红茶的抗疲劳功效尚不确定。初步分析,四种茶叶抗疲劳功效的差异与其中所含的茶氨酸、EGCG、咖啡因三种抗疲劳成分的含量差异有一定的关系。2.通过测定负重游泳实验和血清尿素氮实验两个主要抗疲劳指标,在所确定的同一实验剂量下(1.34g/kg·bw),2008年和2004年普洱茶的抗疲劳效果优于1996年和2000年普洱茶,说明普洱茶的抗疲劳效果随储存年代呈下降趋势,并非如市场炒作时所宣传的普洱茶越陈,功效越强。3.通过对各实验组及对照组小鼠肝脏组织中必需微量元素Cu、Zn、Fe含量的测定,其结果表明：在实验时间内四种茶叶对小鼠肝脏组织中Cu、Zn、Fe的储存含量均无明显影响。综上所述,普洱茶虽有综合抗疲劳功效,但低于绿茶,且贮藏年份越久,保健功效越低。