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本研究采用高致病性禽流感病毒（HPAIV）H5N1亚型A/Duck/zhenjiang/11/00 (DZJ/1100)毒株作为免疫原，免疫8周龄BALB/C雌性小鼠，三次加强免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合，分别用全病毒包被ELISA方法、重组核蛋白（NP）表达蛋白包被ELISA方法和血凝抑制试验（HI）方法检测筛选，阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培养，最后获得H5亚型HA特异性McAb三株：DD7、FG10、CB12；NP蛋白特异性McAb两株：4H7、4H1；病毒其他结构蛋白McAb两株：EC6、EA3。各株McAb腹水效价测定显示三株HA特异性McAb效价（HI效价）依次为： 213、215、211 ；两株NP蛋白特异性McAb效价（ELISA效价）依次为：1:16000、1:32000；两株病毒其他结构蛋白McAb效价（ELISA 效价）依次为1:32000、1:64000。染色体计数分析各株杂交瘤细胞的平均染色体数均在97-108之间，符合脾细胞与SP2/0细胞染色体数之和。抗体亚类检测结果表明三株HA特异性McAbs亚类依次为IgG1、IgG2a、IgG2a ；两株NP蛋白特异性McAbs亚类均为IgM；两株病毒其他结构蛋白McAbs亚类依次为IgG2a、IgG2a；所有McAb均为k链。各H5亚型HA特异性McAb均具有良好酸、碱和热稳定性。三株具有HI活性的H5亚型特异性McAb与其他H5亚型AIV分离株的特异反应和中和实验表明，FG10和CB12对所选择的毒株全部具有HI活性和中和活性，而DD7对DKZJ/0202不表现HI活性和中和活性，说明DKZJ/0202上不存在DD7识别的抗原位点。有趣的是，DD7同样对DKSH/3502具有很高的HI效价，但在鸡胚中和实验中却不表现中和活性。由以上结果可以得出，AIV中具有血凝活性的抗原位点与病毒的中和位点不完全等同。三株H5亚型HA特异性McAb与其他各HA亚型禽流感标准毒之间的特异性反应实验及免疫荧光（IFA）实验结果表明，三株McAbs与其他任何HA亚型禽流感病毒均不具有交叉反应，具有良好的亚型特异性。HA亚型特异性单克隆抗体的制备成功为H5亚型AIV的诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。