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凝血系统与抗凝系统在维持机体凝血与出血平衡中发挥重要作用，当凝血因子或抗凝因子发生质或量的缺陷时，则会扰乱这种平衡，从而诱发出血或血栓性疾病。抗凝血酶(antithrombin，AT)作为机体重要的抗凝蛋白，一旦出现缺陷，或者协同其它血栓形成危险因素，则容易导致血栓性疾病。遗传性抗凝血酶缺陷症是由合成该蛋白的基因突变导致，一般遵循常染色显性遗传性规律，对患者及其子孙后代影响深远。而且近年来，血栓性疾病的发病率逐年递增并严重影响到人类生命健康。对此类疾病家系进行表型诊断及基因分析则有助于阐明疾病的发病机制，从而为该类疾病的早期预防、病因诊断、临床治疗及产前筛查提供理论依据。因此，本研究对两例遗传性抗凝血酶缺陷症家系进行表型诊断与基因分析，旨在初步探讨其分子致病机制。 目的： 通过对两例遗传性抗凝血酶缺陷症家系进行表型检测与基因分析，明确患者基因突变类型，并用生物信息学相关软件对突变位点加以分析，初步探究其分子致病机制。 方法： 1、实验室检测:收集两位先证者及其家系成员的静脉血，采用凝固法在STA-R全自动血凝仪上检测凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶时间(thrombin time，TT)、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）含量;发色底物法检测抗凝血酶活性(antithrombin activity, AT:A)、蛋白C活性(proteinC activity, PC:A)及蛋白S活性(protein S activity, PS:A)，免疫比浊法检测抗凝血酶抗原(antithrombinantigen，AT:Ag)。 2、基因检测:提取两位先证者及家系成员的外周血DNA;设计引物并采用聚合酶链式反应(polymerse chain reaction, PCR)扩增AT基因全部外显子，5'、3'非编码区及其侧翼序列;产物经纯化后直接测序，并与美国国立生物信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)提供的AT基因序列进行比对，寻找可能的基因异常位点，反向测序及非变性聚丙烯酰胺电泳后银染色验证该异常位点的存在。为排筛非AT基因缺陷引起血栓形成的多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点，采用PCR技术扩增相应基因片段，测序后与标准序列比对。 3、数据分析:采用ClustalX软件分析突变位点保守性;用PolyPhen-2和MutationTaster两个程序评价和预测突变位点对蛋白功能的影响;采用蛋白分子内作用力评估程序PIC(Protein Interactions Calculator)进一步分析AT蛋白突变前后分子内氨基酸相互作用力的改变;最后根据蛋白质数据库(Protein database，PDB)提供的蛋白三维空间结构数据(ID:1E05)，用PyMOL Viewer1.5.x软件分别构建野生型和突变型AT蛋白模型，比对分析寻找突变前后蛋白空间构象及分子间作用力的变化。 结果： 1、先证者1的AT:Ag正常，但AT:A降低至28％;基因测序结果显示AT基因2号外显子存在杂合错义突变g.3137C＞T（p.Arg47Cys）。该家系中，除先证者大女儿之外，同样突变亦见于其大儿子、小儿子和小女儿，而且三者的AT:A都低于正常值，AT:Ag正常。 2、先证者2的AT:A、AT:Ag分别为39％和103mg/L，均明显低于正常对照;AT基因3a号外显子发生杂合缺失突变g.5890-5892delCTT，导致Phe121残基丢失，非变性聚丙烯酰胺电泳后银染色结果证明了该突变位点的存在。其父亲、小叔父、哥哥及堂姐亦携带该突变位点，表现为AT:A、AT:Ag共同降低，其他家系成员检测结果在正常范围内。 3、ClustalX软件分析显示Arg47残基及Phe121残基在生物进化中位置高度保守;PolyPhen-2及Mutation Taster程序对g.3137C＞T综合评估表明，错义突变p.Arg47Cys会对AT蛋白功能产生影响;PyMOL Viewer1.5.x软件和PIC程序对错义突变p.Arg47Cys及缺失突变g.5890-5892delCTT共同分析提示，突变会引起氨基酸侧链结构改变及氨基酸内部作用力的变化。 结论： 1、先证者1抗原正常但活性降低，表现为Ⅱ型遗传性抗凝血酶缺陷症;先证者2抗原及活性同步降低，表现为Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症。 2、两例先证者抗凝血酶水平分别与错义突变p.Arg47Cys及缺失突变g.5890-5892delCTT有关。 3、错义突变p.Arg47Cys及缺失突变g.5890-5892delCTT在国内均未见报道。