目的：多发性骨髓瘤（Mutipie myeloma，MM）是一种进展性的疾病，应用化学治疗取得缓解或部分缓解后，大多数会复发，且易出现对多种化疗药物耐药即多药耐药（MDR）。一旦出现MDR，即使加大药物剂量也不易使患者再次获得缓解。因此寻求治疗多发性骨髓瘤新的有效药物，延迟疾病复发时间，是目前多发性骨髓瘤研究的热点。　　 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF Related Apopt--osis Inducing Ligand，TRAIL）是Ⅱ型膜蛋白，通过与其特异性死亡受体（DR4，DR5）结合而激活凋亡信号传导途径，从而诱导肿瘤细胞凋亡，且对正常细胞影响较小。目前美国和中国都已经批准TRAIL的临床实验，但有关TRAIL对血液系统肿瘤尤其是多发性骨髓瘤的研究报道较少。　　 本实验应用人多发性骨髓瘤RPMI8226荷廇裸鼠及昆明种小鼠研究目前新研制的重组变构人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体TRAIL（recombinant mutant human TRAIL，rmhTRAIL）抑制肿瘤的最佳给药剂量及药代动力学。为rmhTRAIL作为一种新型的抗肿瘤生物制剂应用于临床治疗多发性骨髓瘤提供实验依据。　　 方法：　　 1、人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226培养与传代　　 人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226，培养于20％灭活胎牛血清（FBS，购自Gibco公司）、100U/ml青霉素和100μg/ml硫酸链霉素的RPMI1640培养液中，置37℃、体积分数5％的二氧化碳的培养箱中培养，每5～6天传代1次，试验用对数生长期细胞，0.25％胰酶消化，制备单细胞悬液。　　 2、rmhTRAIL对荷瘤裸鼠的肿瘤杀伤作用的实验观察　　 2.1 实验动物BALB/C-nu/nu裸鼠在SPF条下饲养，高效过滤器每小时换气10～15次，相对湿度保持在46％～60％，每日保持10h的光照、14h无光的阴暗周期。　　 2.2建立动物模型在超净台内将裸鼠右下肢外侧皮肤用75％酒精消毒后，皮下接种0.2ml8226悬液，浓度为1×107cell/只，待皮下移植瘤长至0.5cm3，随机分为Ⅰ、Ⅱ实验组，每组分为7小组，每小组6只。各组rmhTRAIL均按每只裸鼠每次腹腔注射0.2mlrmhTRAIL（北京沙东公司）以生理盐水配制成不同浓度，依据各组不同给药天数，按实验要求注射。　　 2.3 观察各组裸鼠成瘤率各组以接种肿瘤细胞后3周为限，裸鼠右下肢外侧皮下出现移植瘤大于0.5cm3为标准，成瘤率=成瘤只数/总只数×100％。　　 2.4 rmhTRAIL治疗后各组抑瘤率以试验结束或裸鼠死亡时皮下剥离移植瘤为准，按公式计算抑瘤率。抑瘤率（％）=（对照组只数-实验组荷廇数/对照组只数）×100％。　　 2.5 rmhTRAIL治疗后各实验组8226裸鼠瘤体积变化每日用游标卡尺测量瘤体长径（a）和短径（b），按移植瘤体积（V，mm3）=ab2/2计算，观察3周，绘制生长曲线。　　 2.6 rmhTRAIL治疗后8226荷唐裸鼠一般情况观察观察进食、进水量，激惹、嗜睡等不良反应。　　 3 rmhTRAIL血清药代动力学　　 3.1药物代谢动物模型昆明种小鼠18只随机分为6组，每组3只。在超净台内用75％的酒精消毒右下腹内侧皮肤，各组均按每次腹腔注射0.2ml配制成不同浓度的rmhTRAIL（批号20080301）。　　 分别于注射后30min，1h，2h，4h，6h，8h和24h，从小鼠眼眶静脉丛取血（每次50-150ul。第6组不取6h和8h时间点），室温放置2h，离心3000rpm，10min，取血清测rmhTRAIL血药浓度。　　 3.2 ELISA方法测定rmhTRAIL血药浓度　　 （1）包被：anti-human TRAIL Capture mAb，1：250稀释于包被缓冲液，100ul/孔，37℃孵育2hr。　　 （2）封闭：1％BSA-PBS封闭，200ul/孔，37℃孵育1小时。　　 （3）加样：系列稀释的CPT标准品及恰当稀释的待测品分别加样。100ul/孔，37℃孵育1小时。　　 （4）检测抗体（Detection antibody）及Streptavidin-HRP：Biotinylated anti human TRAIL mAb+streptavidin-HRP，均1：250稀释于1％BSA-PBS，100ul/孔，37℃孵育1小时。　　 （5）显色：加TMB（四甲基联苯胺）底物液显色，100ul/孔，室温避光反应10min。2M硫酸终止，50ul/孔。然后在酶标仪上读取OD450。（6）结果处理：按照标准品的OD450值-浓度取双对数作直线回归，求出直线公式并计算待测血清中TRAIL样品浓度。根据标准曲线计算出TRAIL样品药物代谢浓度。　　 3 统计学分析采用SAS8.1统计软件进行统计学分析，实验结果以x±s表示，采用完全随机设计方差分析，P<0.05为差异具有统计学意义。　　 结果：　　 1 rmhTRAI抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长的最佳剂量　　 1.1各组移植瘤成瘤率接种后3天后于接种处可见微小突起，以后逐渐明显，接种后15d，有72只裸鼠移植瘤体积均超过1000mm3，接种成瘤率为85％。　　 1.2 rmhTRAIL治疗后各组抑瘤率比较　　 1.2.1实验Ⅰ抑瘤率比较B组、E组移植瘤在d8抑瘤率达50％。B组肿瘤消退最快，在d12全部消退。其余各组在d14肿瘤全部消退，抑瘤率为100％。各组与对照组之间差异有显著性（P<0.05）。　　 1.2.2实验Ⅱ抑瘤率比较 a组肿瘤在d16全部消退，抑瘤率为100％。b组为50％，c组为83％，d组及e组为0％，f组为33.3％。a、b、c、f组与对照组之间差异有显著性（P<0.05）。实验显示rmhTRAIL对PRMI8226抑瘤率呈剂量依赖性。　　 1.3各组rmhTRAIL治疗后荷瘤裸鼠瘤体积变化　　 1.3.1实验Ⅰ rmhTRAIL治疗后荷瘤裸鼠瘤体积变化　　 给药后d2各实验组瘤体积出现减小，d4各组瘤体积较给药前均缩小66％以上，各组d4与d0瘤体积比较存在统计学差异（P<0.05），说明rmhTRAIL对8226移植瘤治疗迅速有效。B组给药总剂量为300mg/kg，在d4消退最明显，肿瘤体积较前缩小84.3％，d12完全消退。其余各组均随时间推移，瘤体积逐渐缩小， A、E、F组总剂量均为100mg/kg，不同给药天数对于瘤体积变化无统计学差异（P>0.05），C组给药总剂量为50mg/kg，A、C、D、E、F组均在d14肿瘤消退。各组与对照组之间存在明显的统计学差异（P<0.05），各组间比较无统计学意义（P>0.05）。在大剂量组瘤体积与rmhTRAIL之间呈剂量依赖性。　　 1.3.2实验Ⅱ rmhTRAIL治疗后荷瘤裸鼠瘤体积变化　　 各组rmhTRAIL总剂量均为40 mg/kg，给药后d0，d2，d4，d6，各实验组的移植瘤体积之间无明显差异。　　 1.4给药后8226荷廇裸鼠一般情况观察对照组荷廇鼠体重进行性增大，各实验组未出现明显进食、进水量减少、消瘦，激惹等不良反应，显示对rmhTRAIL的耐受较好。　　 2 rmhTRAIL药代动力学腹腔给药吸收情况个体差异较大，这可能与腹腔注射给药本身有关。1组（20mg/kg）在给药后1h血药浓度达20000ng/ml，1组半衰期（T1/2）为3h，其余各组血药浓度均在8000ng/ml以下，半衰期（T1/2）为4h～6h。各组在给药24h之内血药浓度降为0。有必要进一步进行静脉给药的药代动力学监测。　　 结论：　　 1 rmhTRAIL可使多发性骨髓瘤RPMI8226荷廇裸鼠移植肿瘤消退，呈时间和剂量相关性。　　 2 本实验未观察到增加rmhTRAIL浓度而导致的药物毒副作用。　　 3 rmhTRAIL的昆明种小鼠药代动力学试验，各试验组rmhTRAIL24h体内药物浓度为0。峰值在rmhTRAIL注射后1～2h，半衰期（T1/2）为3h～6h。