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目的:构建动脉粥样硬化动物模型,探究动脉粥样硬化发生发展的不同阶段时RNF10(环指蛋白10)表达水平的动态变化以及平滑肌细胞生物学特性的变化情况。方法:选取ApoE基因敲除鼠(ApoE-/-)共24只,采用空气干燥法损伤小鼠的颈动脉并以高脂饲料进行饲养,诱导动脉粥样硬化的形成。将24只小鼠中随机分为A、B、C、D四组(每组6只),其中A组作为正常对照组(小鼠不做颈动脉损伤处理并采用普通饲料饲养),B组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养8周,C组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养12周,D组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养16周。在各时间点处死小鼠,分离平滑肌细胞并进行原代培养。颈动脉样本进行HE染色和油红O染色并观察,采用免疫组化检测RNF10、SMA、SMHC、VEGF的表达情况。采用免疫荧光对细胞进行鉴定,CCK8实验检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,采用划痕实验来检测各组细胞迁移能力的变化,蛋白免疫印迹法检测平滑肌细胞中RNF10、SMA和SMHC蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测各组平滑肌细胞表型的变化情况。结果:HE实验结果显示B组样本中可见动脉内膜有少量增厚,泡沫细胞聚集,出现脂质沉积;C组可见胶原纤维,出现玻璃样变,内膜大量下脂质沉积、脂质纤维帽形成;D组组织样本中可观察到动脉内膜的显著增厚,局部胆固醇结晶和钙盐沉积,大量的泡沫细胞聚集。油红O染色显示A组无明显着色,B、C、D三组中有明显染色,且染色面积占总面积的比率逐渐增高。这证实动脉粥样硬化的动物模型构建成功,且B、C、D组分别呈现出不同程度的动脉粥样硬化病变。免疫组化染色结果显示:A组中可见组织内RNF10、SMA和SMHC染色强阳性,VEGF染色阴性。B组斑块组织内RNF10、SMA和SMHC染色阳性染色,VEGF染色阳性。C组斑块组织内SMA和SMHC染色呈弱阳性,VEGF染色呈强阳性。D组中组织内SMA和SMHC染色阳性,VEGF染色阳性。CCK8实验结果显示:与正常对照组相比,其余三组细胞的增殖能力有显著提高,且其细胞活性在三组中呈现逐渐增高的趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果显示:与正常对照组相比,B、C两组中细胞的凋亡率明显地降低,处于G0/G1期的细胞比例明显降低;S期细胞的占比明显增高,该差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果:在划痕后第12h时,各组细胞可观察到较明显的迁移,其中A组中的划痕宽度约0.90cm,B组划痕约0.65cm,C组划痕约0.55cm,D组划痕约为0.5cm;在24h时,A组划痕约0.60cm,B组划痕约0.40cm,C组划痕约0.20cm,D组划痕基本闭合。western Blot实验结果显示:于A组相比,RNF10、SMA和SMHC在其他三组中的表达量明显更低(P<0.05)。RNF10、SMA和SMHC的表达在B、C组中逐渐下降,在D组中小幅度提高,但表达水平仍然低于A组。然而,VEGF在其余三组中的表达量相较于A组都有较明显提高(P<0.05)。细胞免疫荧光实验显示:与A组相比较,RNF10、SMA和SMHC在其他三组中的表达量明显降低,细胞的表型有改变。RNF10、SMA和SMHC在组织和平滑肌细胞中的表达水平均先逐渐降低然后升高,但仍显著低于正常水平。结论:用空气干燥法ApoE-/-鼠内膜后再用高脂饮食处理可以更快地获得动脉粥样硬化的动物模型。与正常血管组织相比,RNF10、SMA和SMHC在动脉粥样硬化的组织中的含量明显降低,VEGF的含量有增高。随动脉粥样硬化的程度增高,平滑肌细胞的表型开始改变,细胞的增殖迁移能力均逐渐提高,RNF10、SMA和SMHC在细胞中的表达水平均先逐渐降低然后升高,但仍显著低于正常水平。RNF10可能在动脉粥样硬化的发生发展中有重要作用,其表达情况与动脉粥样硬化密切相关。