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本文为了开发工业化高效制备猪血红蛋白降血压活性肽的工艺,通过分析蛋白酶水解猪血红蛋白粉条件的优化,再对水解液获得活性较高的血管紧张素I转换酶(ACE)抑制肽的膜分离过程进行研究。确定了血管紧张素I转换酶抑制活性肽制备工艺。主要研究内容和结果如下:1.蛋白酶水解条件。确定猪血红蛋白需多次水解,第一次水解蛋白酶为胃蛋白酶,其酶解条件为:底物浓度3.0%、酶与底物质量比1.0%,温度37℃、p H 3.0、酶解时间12 h,所得产物水解度为18.1%;将产物依次通过截留分子量30 k Da、10 k Da、6 k Da的超滤膜,得到四个组分,冻干测ACE抑制率(质量浓度1 mg/m L),分子量大于30 k Da组分抑制率为16.5%、呈暗红色粉末;分子量10-30 k Da组分抑制率为21.7%,呈深黄色粉末;分子量6-10 k Da组分抑制率为24.3%,呈淡黄色粉末;小于6 k Da组分抑制率为55.6%,呈白色粉末状,且感官质量最高。利用高效液相色谱法测定分子量小于6 k Da多肽中ACE抑制肽VVYPWT和LGFPTTKTYFPHF含量,分别为0.094%和0.891%。2.膜分离条件优化。考察操作压力、超滤温度、料液pH对膜通量的影响,确定最佳的超滤条件为操作压力0.17 MPa、超滤温度40℃、料液p H 3.0;对超滤膜清洗,先用2.0%的HCL溶液清洗15 min,再用0.5%的Na OH溶液清洗15 min,清洗效果最好,膜恢复率达到95%以上。3.多步水解条件确定。对一次水解产物超滤所得ACE抑制活性较低部分再酶解,确定最佳酶解条件为:P-I(≥30 k Da)和P-II(10-30 k Da)组分,二次酶解采用碱性蛋白酶,酶解时间均为1 h;P-III(6-10 k Da)组分,二次酶解采用中性蛋白酶,酶解时间5 h。上述水解产物再通过超滤,ACE抑制活性较低部分再酶解,条件确定为:P-I-I(≥30 k Da),三次酶解采用碱性蛋白酶,酶解时间1 h;P-II-I(10-30k Da),三次酶解采用碱性蛋白酶,酶解时间3 h。(其他条件均为底物浓度2.0%、酶与底物比1.0%,温度和p H均为各酶最适条件)。