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前言 细胞凋亡异常在许多人体恶性肿瘤的发病学上占有十分重要的地位。caspase-9及Bcl-2、细胞色素-C等多种癌基因产物均参与细胞凋亡的调节。胃癌是危害人类健康的主要恶性肿瘤之一，其发病原因尚未十分明确。目前认为细胞凋亡与肿瘤的发生发展有密切关系。有关caspase-9与胃癌的相关报道甚少，其与细胞色素-C、Bcl-2的表达的关系尚未明了。为此我们检测caspase-9在胃癌中的表达及其与细胞色素-C、Bcl-2的表达的相关性，并探讨其意义，从而为胃癌的诊断和治疗提供一种新的思路。 材料和方法 1 研究对象 选择临床及病理资料齐全的中国医科大学第二临床学院普外科2001～2003年手术切除并经病理证实为胃癌的标本54例，全部病例术前均未经过放化疗。 2 主要试剂 caspase-9、Bcl-2、细胞色素-C鼠抗人单克隆抗体购自北京中山公司，免疫组化S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州市迈新生物技术开发公司。 3 研究方法：免疫组织化学染色(SP法) 将蜡块制成5μm厚的切片。选取一张进行常规HE染色，确定组织学诊断及分化程度。检测caspase-9、Bcl-2、细胞色素-C在胃癌中的表达，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水；抗原修复：0.01M PH6.0枸橼酸盐缓冲液高温高压1 .5分钟;分别用3%HZOZ和非免疫血清阻断内源性过氧化物酶活性并封闭非特异性结合位点;滴加一抗，4℃过夜;生物素标记的二抗37℃孵育30分钟;SP复合物37℃孵育30分钟;D AB显色;苏木素复染3分钟;盐酸酒精分化2一3秒;脱水、透明、中性树胶封片。已知阳性的乳腺癌切片作阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。 4结果判定 细胞浆或核膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞，以阳性细胞密度最高的区域计数5个高倍视野(x 400)中阳性细胞所占的百分比例定为:阳性细胞蕊5%为阴性组，阳性细胞>5%为阳性组。 5统计学分析 应用sPss软件进行统计学处理各项指标间差别检验均应用扩检验及确切概牢法，P<0.05有统计学意义。实验结果 1.easpase一9、细胞色素一c、Bel一2在胃癌中的表达 casPase一9、细胞色素一C蛋白表达阳性者染色主要定位于正常细胞胞浆中，Bcl一2基因表达阳性者染色主要定位于肿瘤细胞胞浆中，均为粗细不一的棕黄色颗粒。caspase一9在胃癌和癌旁组织中阳性率分别为27.8%和61 .1%，细胞色素一C在胃癌和癌旁组织中阳性率分别为37.0%和79.6%，Bcl一2在胃癌和癌旁组织中阳性率分别为64.8%和25.9%。在胃癌与癌旁组织中casPase一9、细胞色素一C、Bcl一2的表达均有显著性差异(P<0 .01)。 ’2、Caspas。一9、细胞色素一c、Bd一2在胃癌中的表达与临床病理特征的相关性 casPase一9在不同组织学分级间、TNM分期间无显著性差异(P二0.324，P二0.177);在临床分期、淋巴结转移与非淋巴结转移组间caspase一9阳性率有显著性差异(P二0.018，P二0.027)。细胞色素一C在不同组织学分级间、淋巴结转移与非淋巴结转移组、不同临床分期及，rNM分期间均无显著性差异(P=0.131，P二0.983，P=0.529，P=0.063)。Bel一2阳性率在不同组织学分级间、淋巴结转移与非淋巴结转移组间有显著性差异(P=0.035，p=0.010);在临床分期、TNM分期间无显著性差异(P=0.466，.P=0 .346)。 3、胃癌中easpase一9、细胞色素一C、Bel一2表达的相关性 在casPase一9基因表达阳性的巧例中有细胞色素一C表达阳性11例，在细胞色素一C基因表达阴性的34例中有casPase一9表达阴性30例，两者之间有相关性(XZ二n .733，P<0.01).在casPase一9基因表达阳性的15.例中有Bd一2表达阳性6例，在Bd一2基因表达阴性的19例中有easpase一9表达阴性10例，两者之间有相关性(XZ=5 .005，P<0 .05).在细胞色素一C基因表达阳性的20例中有Bcl一2表达阳性12例，在Bcl一2基因表达阴性的19例中有细胞色素一C表达阴性n例，两者之间无相关性(X，二0.323，P>0.05)。综上所述，在胃癌中caspase一9的表达与细胞色素一C、Bd一2的表达均有相关性，而细胞色素一C与Bcl一2的表达无相关性。讨论 肿瘤的发生与控制细胞增殖的癌基因的过度表达有关，也与抑制细胞凋亡的基因的高表达及诱导细胞凋亡的抗癌基因的变异失活有关。细胞凋亡机制被不适当的终止后，为细胞癌变提供了重要前提。 已知细胞凋亡有两条途径:一是TNF受体家族成员参与的通过caspase一8活化的途经，称为外源性凋亡途径;二是细胞色素一C参与的通过casPase一9活化的途径称为内源性凋亡。两条途径最后均通过激活下游的效应因子casPase一3，7使细胞发生凋亡。Bcl一2基因功能在于与细胞色素一C和casPase一9相互作用，干扰凋亡的正常进行。 本实验通过对54例胃癌及癌旁组织分析发现，胃癌组织中casPase一9.与细胞色素一C呈低表达，提示casPase一9与细胞色素一C参与正常凋亡过程，其表达的异常降低可能与胃癌的发生密切相关。Bcl一2在胃癌组织中呈高表达，提示Bcl一2可能通过抑制细胞凋亡过程进而促进肿瘤发生。 在54例胃癌组织?