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我国是食管癌高发国家,占全球病例数的一半。太行山区是我国的高发地区,包括河南林县、河北磁县、山西阳城等。环境和遗传因素共同作用食管癌的演变。食管癌地区分布差异和高发区家族聚集现象提示遗传因素起重要作用。Eph家族是目前已知最大的酪氨酸激酶受体,广泛参与生物学事件的起始和调控。Eph和Ephrin在多种肿瘤高表达并促进肿瘤进展。EphrinA2是EphA家族的重要配体,在乳腺癌和肝癌的研究被报道。EphA7是EphrinA2的受体,在肝癌、肠癌、胃癌的研究被报道。目的研究EphrinA2和EphA7在食管癌组织:mRNA和蛋白表达水平及其与临床病理参数的关系,进一步研究EphrinA2对食管癌细胞生长影响。材料与方法1.研究对象的选取,组织标本的采集及临床资料的收集选取92例在林州市肿瘤医院接受手术且无放化疗史的食管癌患者。采集标本前向患者及家属说明研究意义并获得患者同意。根据病历收集患者临床资料。2.组织样本中EphrinA2和EphA7 mRNA表达水平的测定采用real-time PCR技术,以β-actin为内参基因,检测EphrinA2和EphA7 mRNA水平。3.检测EphrinA2和EphA7在组织样本的蛋白水平通过Western blot和免疫组化法检测EphrinA2和EphA7蛋白水平。在200倍显微镜下观察免疫组化切片染色最强的3个视野,以胞浆棕黄色为阳性,癌组织与正常组织阳性细胞百分比的比值作为判断食管癌蛋白表达水平指标。4.检测EphrinA2在食管癌细胞系的表达和影响采用Western blot技术检测EphrinA2在8种人类食管鳞癌细胞系中的表达情况。检测EphrinA2对KYSE-180细胞系的影响,绘制生长曲线。5.统计学分析采用SPSS12.0软件,通过t检验比较EphrinA2和EphA7 mRNA水平,通过χ2检验比较EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白水平与临床病理参数关系。检验水准α=0.05结果1食管癌组织的荧光定量PCR结果1.1食管癌组织中EphrinA2和EphA7 mRNA水平EphrinA2和EphA7 mRNA水平分别在59.8%(55/92)和73.9%(68/92)的癌组织上调。癌组织EphrinA2和EphA7 mRNA水平均显著高于正常组织(t=5.695,P<0.05;t=7.179,P<0.05)。两基因]nRNA水平显著正相关(r=0.283,P<0.05)。1.2食管癌组织中EphrinA2和EphA7 mRNA水平与临床病理参数的关系EphrinA2 mRNA在不同病理类型差异显著(χ2=6.463,P<0.05),在淋巴结转移组显著高于未转移组(χ2=6.800,P<0.05),在肿瘤家族史组显著高于无肿瘤家族史组(χ2=6.049, P<0.05)。EphA7 mRNA在60岁以上组显著高于60岁以下组(χ2=6.506,P<0.05),在淋巴结转移组显著高于未转移组(χ2=11.272,P<0.05)。2.食管癌组织的免疫组化和Western blot结果2.1食管癌组织中EphrinA2和EphA7蛋白水平免疫组化和Western Blot结果显示癌组织EphrinA2和EphA7蛋白水平高于正常组织。2.2 EphrinA2和EphA7蛋白水平与临床病理参数的关系EphrinA2蛋白水平在肿瘤家族史组显著高于无肿瘤家族史组(χ2=4.304,P<0.05),在淋巴结转移组显著高于未转移组(χ2=4.608, P<0.05)。EphA7蛋白水平在淋巴结转移组显著高于未转移组(χ2=4.800,P<0.05)。3.检测EphrinA2在人类食管鳞癌细胞系的表达情况和对细胞系的生长影响Western blot结果显示EphrinA2在KYSE-180细胞表达最低。MTT比色法显示KYSE-180细胞系的吸光度每天都有EphrinA2H> EphrinA2L>空载细胞。结论:1. EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白在食管癌组织较正常组织表达上调。EphrinA2和EphA7 mRNA水平正相关,可能在肿瘤的发生发展中起协同作用。2.EphrinA2 mRNA和蛋白表达水平与肿瘤家族史和淋巴结转移密切相关。EphA7 mRNA和蛋白表达水平与淋巴结转移密切相关。3. EphrinA2可以促进食管肿瘤细胞生长。4. EphrinA2和EphA7可能是食管癌转移的相关基因,EphrinA2基因可以促进食管癌细胞的生长增殖,可能成为基因治疗的一个新靶点。