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目的:1.建立生物检材中氯氰菊酯及其代谢物的前处理和HPLC-MS-MS(高效液相色谱串联质谱)检测方法;2.研究氯氰菊酯及其代谢物在实验动物体内的代谢动力学规律,建立氯氰菊酯的毒物动力学模型、方程和参数,探讨血液、尿液、胆汁中氯氰菊酯的检出时限;3.研究氯氰菊酯及其代谢物与服药时间之间的关系,建立氯氰菊酯服药时间的推断方法;方法:1.受试动物:6只健康雄性成犬(杂种犬),体重12kg左右,均由山西医科大学实验动物中心提供。受试动物在受试前均未服用过任何药物。本研究方案通过伦理审查(山西医科大学2014087)。2.标本采集:6只雄性犬全麻后,行胆囊造瘘术,接引流袋引流胆汁,待其引流通畅后,禁食12h后经口灌胃1/4 LD50氯氰菊酯原药,分别于灌胃前及灌胃后0.2h、0.5h、1h、3h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h收集胆汁、血液、尿液,-20℃冰箱保存待检。3.提取检测:生物样品中添加内标8ng后采用二氯甲烷液液萃取法提取,HPLC-MS-MS检测,MRM方式记录,保留时间和定性离子对定性,内标法定量。4.数据处理方法:WinNonlin药代动力学软件;SPSS19.0统计学软件,采用方差分析。结果:1.样品检测:HPLC-MS-MS可同时定量检测CYM(氯氰菊酯)、3-PBA(3-苯氧基苯甲酸)、dcva(二氯菊酸)。氯氰菊酯的最低检测限为0.49ng/ml,线性范围为0.2-10μg/ml;其代谢物3-pba、dcva的最低检测限为0.49ng/ml,线性范围为0.02-4μg/ml;相关系数r值均大于0.99,rsd均小于3%,回收率为95.33%-106.6%。2.毒物动力学:经口灌胃1/4ld50氯氰菊酯后,三种检材中的药物浓度:原体浓度总体上为血液>尿液>胆汁,3-pba浓度总体上为尿液>胆汁>血液,dcva浓度总体上为胆汁>尿液>血液;不同检材中的药物浓度:血液和尿液中3-pba>dcva>cym,胆汁中dcva>3-pba>cym。尿液和胆汁中的氯氰菊酯及其代谢物均在1-2小时达到峰值,血液中的氯氰菊酯及其代谢物在7-8小时达到峰值。氯氰菊酯药物原体及其代谢物在血液、尿液、胆汁中的药物动力学均符合一级吸收药物动力学模型,氯氰菊酯药物原体在血液、尿液、胆汁中的吸收半衰期分别为1.66±1.92h、0.70±0.47h和0.43±0.23h,消除半衰期分别为5.84±4.26h、7.99±6.51h和3.93±0.71h;其代谢物3-pba在尿液、胆汁中吸收半衰期分别为0.27±0.27h和0.64±0.07h,在血液、尿液、胆汁消除半衰期分别为5.33±2.81h、1.17±0.78h和1.36±0.11h;其代谢物dcva在血液、尿液、胆汁中吸收半衰期分别为4.29±1.60h、0.12±0.09h和0.50±0.28h,消除半衰期分别为5.25±2.38h、1.99±1.12h和3.36±1.50h。3.服药时间的推断:采用一个时间点的毒物原体和代谢物浓度比值与服药时间拟合,建立了一种推算氯氰菊酯服药时间的回归方程,绝大多数推算值与实际服药时间的误差小于20%。结论:1.本实验建立了氯氰菊酯及其代谢物的毒物代谢动力学研究模型,氯氰菊酯毒物原体在血液和尿液中药物动力学符合一级吸收二室开放模型,在胆汁中符合一级吸收一室开放模型;代谢物3-pba在血液和尿液中药物动力学符合一级吸收一室开放模型,在胆汁中符合一级吸收二室开放模型;代谢物dcva在胆汁和尿液中毒物动力学符合一级吸收二室开放模型,在血液中符合一级吸收一室开放模型;所得毒物动力学参数可为氯氰菊酯中毒的相关法医学鉴定提供依据。2.本实验初步建立了氯氰菊酯服药时间的推断方法。根据某个时间点的毒物原体与代谢物浓度的比值可大致推断服药时间。