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川硬皮肿腿蜂(Scleroderma sichuanensis Xiao),属肿腿蜂科(Bethylidae)天牛肿腿蜂属(Scleroderma),是一种能寄生多种钻蛀性害虫的天敌昆虫,具有重要的生物防治价值。昆虫通过感知空气中的挥发性气味物质指导其行为反应,这包括两个重要方面：一是寄主植物挥发出的多种气味物质组成的化学图谱,二是昆虫具有与之相适应的结构和识别机制,只有对这两方面都进行了深入研究,才能更好地应用到害虫防治的实践中。近年来,国内对昆虫感受气味物质的行为化学模式的研究较多,但是昆虫气味结合蛋白及其与气味识别的关系研究较少,对寄生蜂的相关研究则更少。因此,我们利用Y型行为仪测试不同日龄的川硬皮肿腿蜂经云斑天牛虫粪木屑混合物处理后的行为反应,研究川硬皮肿腿蜂对云斑天牛虫粪木屑挥发性气味的学习效应；根据已报道的管氏肿腿蜂(Sclerodermus guani Xiao et Wu)气味结合蛋白的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法获得编码川硬皮肿腿蜂两种气味结合蛋白的cDNA片段,并对其进行基因克隆;利用SYBR Green Ⅰ荧光染料法,采用Real-Time PCR比较Ct值的相对定量法获得川硬皮肿腿蜂不同部位、不同日龄经历及未经历云斑天牛虫粪木屑的气味结合蛋白基因的转录表达谱,研究其基因表达规律,初步探索川硬皮肿腿蜂学习效应对气味结合蛋白表达的影响,主要研究结果如下：1.不同日龄川硬皮肿腿蜂对云斑天牛虫粪木屑混合物的学习效应经历云斑天牛虫粪木屑混合物气味处理后的肿腿蜂与未经历气味处理的肿腿蜂相比,前者对该气味的选择率均得到提高。川硬皮肿腿蜂在羽化和成虫初期(1、2日龄)对云斑天牛虫粪木屑混合物气味学习效应逐渐增强,在羽化后第2日学习效应最强,而在羽化后第4-10日学习效应减弱,在羽化后第12日学习效应又显著增强。2.川硬皮肿腿蜂OBP基因克隆及序列分析根据已经报道的管氏肿腿蜂Sgua-OBP1和Sgua-OBP2基因设计引物,克隆分析了编码川硬皮肿腿蜂气味结合蛋白Ssic-OBP1和Ssic-OBP2的cDNA (GenBank序列号分别为：KM924438和KM924439)。根据测序结果和结构分析表明,川硬皮肿腿Ssic-OBP1基因包含1个长为401 bp的开放阅读框,编码133个氨基酸残基；Ssic-OBP2基因包含1个长为420 bp的开放阅读框,编码139个氨基酸残基。Ssic-OBP1与Ssic-OBP2蛋白均成酸性,前者分子量约为14.4 kD,后者分子量约为15.7 kD,均含有6个保守的半胱氨酸,主要由6个α螺旋组成,具有气味结合蛋白的典型特征。多序列比对和进化树分析结果表明推定的Ssic-OBP1氨基酸序列与管氏肿腿蜂Sgua-OBP1具有98%的相似性,与其它亲缘关系的昆虫较远的昆虫相似性均低于49%。Ssic-OBP2与管氏肿腿蜂Sgua-OBP2的相似性高达99%,与其它亲缘关系较远的昆虫相似性低于39%,在一定程度上说明亲缘关系越近,气味结合蛋白的氨基酸序列相似性越高。3.川硬皮肿腿蜂Ssic-OBP1和Ssic-OBP2在成虫各组织的表达两种气味结合蛋白均为全身分布蛋白,其中Ssic-OBP1在肿腿蜂触角高丰度表达而低丰度地表达于其他组织(如头部、胸部、腹部、足)；Ssic-OBP2高丰度地表达于肿腿蜂的触角而在胸部、腹部、足中低丰度表达,在头部的表达次于触角但高于其它组织。4.不同日龄及经历的川硬皮肿腿蜂OBPs基因的转录表达研究未经历过云斑天牛虫粪木屑气味的肿腿蜂头部和触角内的两种气味结合蛋白,随着羽化后日龄的增加,表达量变化不大,而经历过云斑天牛虫粪木屑气味的肿腿蜂头部和触角内的两种气味结合蛋白,在羽化后1、2日表达量先逐渐上调到羽化后第2日达到最大,然后到羽化后第4日表达量急剧下调,直到羽化后第10日都较低丰度的稳定表达,在第12日又急剧上调。两种不同处理方式的肿腿蜂气味结合蛋白表达量比较发现,Ssic-OBP1和Ssic-OBP2蛋白在经历云斑天牛虫粪木屑气味后,表达量增加,说明这两种蛋白可能为普通气味结合蛋白GOBPs,主要作用于寄主相关挥发性气味等,在寄主搜索定位过程中起重要作用,两种气味结合蛋白可能可与云斑天牛虫粪木屑挥发物中的某种或某类物质特异性结合,在经历相关气味后导致相应蛋白的表达增加。两种蛋白的表达量变化趋势与川硬皮肿腿蜂经历相同气味后的学习效应变化趋势相似,说明川硬皮肿腿蜂的学习效果好坏与两种气味结合蛋白的多少可能有关。