Endoglin主要表达于肿瘤的新生血管内皮细胞细胞膜，与细胞增殖有关，是诊断肿瘤、肿瘤复发，转移及判断肿瘤病人预后的理想指标。以endoglin为靶点的免疫治疗和以endoglin启动子的特异转录强启动性为基础的基因治疗显示良好前景。 高选择性的靶向肿瘤组织给药系统，对于提高抗肿瘤药物和生物制剂的治疗效果，降低它们的用量，尤其显著降低它们的毒性和副作用，具有重要意义。为此，我们构建了含重组蛋白F3T7的基因序列的质粒载体pEKH-F3T7。 F3肽是人类高迁移蛋白2(Humanhighmobilitygroupprotein-2，HMGN-2)N-末端的31个氨基酸的片段。F3肽段几乎能与所有被测试的肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞高选择性地结合。可以将噬菌体和荧光染料带到肿瘤细胞。动物实验表明，兔子静脉注射HMGN-2后，在体内能定向分布到HL-60和MDA-MB-435的肿瘤生长部位。因此，F3可以用作肿瘤组织靶向给药的导向肽，将抗肿瘤药物的肽类、药物导向肿瘤组织，实现靶向给药。Tumstatin(Ⅳ型胶原α3链非胶原区片段)是一种新血管生成抑制肽，通过抑制新血管的生成，阻断肿瘤细胞的营养供应，抑制肿瘤细胞的生长。tumstatin抑制血管生成的活性位于它的54-124aa残基、抑制肿瘤细胞增殖活性位于它的185-203aa残基。tumstatin的72-97aa残基为具有抑制新血管生成活性的最小片段，即活性T7肽段。重组蛋白F3T7是Ala-Ala-Alalinker连接F3肽和T7肽段。 本课题运用亚克隆技术从重组克隆载体pEKH-F3T7获得F3T7基因，并构建F3T7表达载体，利用大肠杆菌表达体系表达F3T7，亲和层析纯化获得重组的蛋白，并检测重组蛋白对血管内皮细胞的靶向性及体外抗肿瘤血管内皮细胞增殖的生物学活性，以便进一步研究其作用机理并且为临床应用奠定基础。 第一部分：从已克隆的重组克隆载体pEKH-F3T7获得F3T7基因，构建融合表达载体pET32a(+)-F3T7，重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，用Ni2-NTA琼脂糖树脂亲和层析对F3T7可溶性蛋白进行纯化，透析去盐，Westernblotting鉴定，于4℃冰箱保存。 第二部分：利用MTT比色法分析重组蛋白F3T7对正常HUVEC增殖活性的影响。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记蛋白，与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人正常肝细胞(L02)共培养，于荧光共聚焦显微镜下观察FITC标记的蛋白在细胞的分布，分析融和蛋白与血管内皮细胞(HUVEC)结合的亲和力。采用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(CAM)，检测重组蛋白F3T7的抗血管活性。 本文采用亚克隆的方法，成功构建了新的表达载体pET32a(+)-F3T7,导入BI21(DE3)，获得转化的菌株，并用IPTG可诱导，表达出可溶性的重组蛋白F3T7，分离纯化了重组蛋白F3T7。初步实验表明，F3T7能高亲和力地与血管内皮细胞结合，抑制血管内皮细胞生长并具有抗新血管生成的活性。为进一步进行动物实验，研究此种新型融合肽的功能和作用机理打下基础。