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研究背景与目的: HIV(human immunodeficiency virus,HIV)是人类免疫缺陷综合征(humanimmunodeficiency syndrome,AIDS)——艾滋病的病原体。绝大多数HIV感染者在感染后经历2~10年的潜伏期,开始出现反复难愈的感染、肿瘤等AIDS相关性疾病。有不到5% HIV感染者在感染十五年以上未出现免疫缺陷所致的感染和肿瘤等疾病,将这部分感染者称为HIV感染长期不进展者(long-term non-progressors,LTNP)。现有研究资料显示:LTNP现象与宿主遗传特征、对HIV的易感性、个体的免疫功能和健康状况,以及病毒亚型及遗传变异等多种因素相关。 河南省HIV感染者在传播途径、被感染者遗传特性、生存状态等方面均与国内其他地区及国外HIV感染人群有所不同,为进一步探讨HIV感染后的发病机制以及人体抗感染能力,为寻求更加有效的预防HIV感染和防治AIDS的方法,本研究对河南省感染HIV-Ⅰ类病毒15年以上人群的免疫学特征进行了分析。 研究方法 (1)研究对象与分组 选择60例HIV感染者,年龄30-60岁(平均38.7±8.2岁)。均经过HIV确认试验证实为HIV感染者,并未接受过HIV抗病毒治疗,患者来自河南确山县及尉氏县,均有有偿献血感染史。其中,HIV感染长期不进展组(LTNP):20例。HIV病毒感染时间超过15年,CD4+T细胞>500个/μl,无细胞免疫缺陷相关的感染和肿瘤等临床症状;HIV感染无症状组:20例,CD4+T细胞介于200~500个/μl之间,仅表现为淋巴结肿大、未出现机会感染和肿瘤;典型进展组(AIDS组):20例,CD4+T细胞<200个/μl或出现典型的艾滋病指征性症状;健康对照组:20例,无显著HIV接触史的健康人,年龄、性别、居住地与HIV感染组无显著差异。 (2)流式细胞术检测静脉血淋巴细胞亚群 取100μL全血,分别加入不同荧光标记单抗20μL,室温避光孵育20min,经红细胞裂解液裂解红细胞和PBS洗涤,收集淋巴细胞,每管加入PBS0.5mL,上流式细胞仪检测。 (3)酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子水平 按照IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β1检测试剂盒进行操作。将待测样本分别加入反应板,每孔100μl,37℃,2h;反复洗涤后每孔加入一抗(分别为抗IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β单抗)150μl,37℃,孵育1h;充分洗板后,每孔加入酶标抗体工作液100μl,37℃孵育1h;洗板,每孔加入底物工作液100μl,置37℃避光反应5-10min,加终止液1滴终止反应;上酶标仪经492nm波长测吸光度值。根据标准曲线判断各种细胞因子含量。 (4)流式细胞术检测CD4+T细胞表面CCR5和CXCR4的表达 取100μL全血,分别加入CD4-FITC单抗和CCR5-PE或CXCR4单抗,经孵育、裂解红细胞、洗涤等过程,上流式细胞仪检测。 (5)统计学处理 采用SPSS10.0软件包进行统计学分析,采用独立样本t检验和配对t检验,P<0.05为有统计学意义。 结果 (1) LTNP外周血CD4+T细胞亚群 LTNP组CD4+T细胞总数与健康对照组无显著差异(P>0.05),但高于HIV感染无症状组和AIDS组(P<0.05);LTNP组CD4+T细胞亚群CD4+CD45RA+、CD4+CD28+和CD4+CD95+T细胞也与健康对照组无显著差异(P>0.05),显著高于HIV感染无症状组和AIDS组(P<0.05);与其他T细胞亚群不同的是,LTNP组CD4+CD45RO+记忆性T细胞含量显著低于健康对照(P<0.05);CD4+CD25+T细胞比例总体含量较低,在LTNP和AIDS组也显示出与健康对照组和无症状组的显著差异(P<0.05)。 (2) LTNP外周血CD8+T细胞亚群 LTNP组、无症状组和AIDS组CD8+T细胞百分比显著高于健康对照组(P<0.05),其中疾病发展最严重的AIDS组含量最高、无症状组次之,LTNP组最低,各组之间均有显著差异(P<0.05);而CD8+CD38+、CD8+CD95+T细胞百分率在LTNP组显著低于无症状组和AIDS组(P<0.05)、显著高于健康对照组(P<0.05)。 (3)LTNP外周血细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β含量 LTNP组的IL-2、IFN-γ血浆含量接近正常对照水平,无显著差异(P>0.05),显著高于无症状组和AIDS组(P<0.05); IL-10、TGF-β水平明显高于AIDS组(P<0.05)。 (4) LTNP组CD4+T细胞表面CCR5和CXCR4分子的表达 LTNP组CD4+T细胞表面CCR5表达量显著低于无症状组和AIDS组(P<0.05),但与正常对照组无显著差异(P>0.05)。CXCR4表达在各组之间均未见显著差异(P>0.05)。 结论 HIV感染长期不进展者CD4+T细胞各亚群数量和功能接近正常,且CD4+T细胞能有效地辅助CD8+T细胞活化发挥免疫效应,这些机制是HIV感染后长期不进展的重要因素之一。