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研究一活血生骨汤联合打压支撑植骨术治疗塌陷前期ONFH中期随访研究目的:观察活血生骨汤联合打压支撑植骨术治疗塌陷前期ONFH的临床疗效,探讨优势保髋方法,并研究其作用机理。方法:将62例(80髋)于2013年2月至2016年10月在临沂市人民医院股骨头专科住院的ONFH患者按患者意愿分为治疗组和对照组,完成治疗并获得随访的患者60例(78髋),治疗组男25例(33髋),女4例(5髋),年龄22-50岁,平均39.7岁,病程 1-12 月,平均 4.6 月,ARCOⅡA 期 6 例 8 髋,ARCOⅡB 期 14 例 1 8 髋,ARCOⅡC期9例12髋,给予打压支撑植骨术,术后给予口服活血生骨汤,每日1剂;对照组男26例(33髋),女5例(7髋),年龄23-49岁,平均38.7岁,病程1-13月,平均4.8 月,ARCOⅡA期 7例 10髋,ARCOⅡB 期 15 例 18髋,ARCOⅡC 期 9例 12髋,给予打压支撑植骨术。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。从治疗前、后Harris评分(HHS)评价临床疗效,影像学检查观察股骨头形态改变,记录股骨头塌陷例数,并抽取血清检测低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、血清骨钙素(BGP)。结果:术后两组患者切口均Ⅰ期愈合,无严重并发症出现。两组患者术后均获得24个月以上随访,24个月随访时治疗组有4髋塌陷,而对照组有12髋出现塌陷,有显著性差异(P=0.033)。术后6、12和24个月时,治疗组和对照组HHS均高于治疗前(P<0.01),治疗组HHS优于对照组,有显著性差异(F=11.334,P<0.01),两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(F=6.097,P<0.01)。治疗后6、12个月时两组血清BGP水平均高于治疗前(P<0.05),治疗后12个月时与治疗后6个月时相比较,虽有所增加,但差异均不显著(P>0.05),两组间总体均值有显著性差异(F=11.528,P<0.01);两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(F=13.702,P<0.01)。关于血清TG和LDL,两组治疗前比较差异不显著(P>0.05),而治疗后6、12个月时治疗组明显低于治疗前(P<0.05),对照组与治疗前比较差异不显著(P>0.05),两组间总体均值相比有显著性差异(P<0.05),两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(P<0.01)。结论:活血生骨汤联合打压支撑植骨术较单纯打压支撑植骨术明显提高了患者术后HHS,降低了股骨头塌陷率,可能是活血生骨汤降低了机体血清TG和LDL水平,规避了股骨头塌陷进展因素,减缓了 ONFH发展进程;也可能是提高了血清BGP水平,增强了成骨细胞活性,促进股骨头内新骨形成。研究二活血生骨汤联合ESWT治疗老年早期肾虚血瘀型ONFH研究目的:观察活血生骨汤联合ESWT治疗老年早期肾虚血瘀型ONFH的疗效及安全性,探讨优势保髋方法,并研究其作用机理。方法:将56例(96髋)于2014年6月至2016年12月临沂市人民医院股骨头专科门诊或住院的老年早期ONFH患者按患者意愿分为治疗组和对照组。完成治疗并获得随访的50例(86髋),其中治疗组男23例(38髋),女1例(2髋),年龄60-68岁,平均63.4岁,病程1-8月,平均3.6月,ARCO Ⅰ期6例10髋,ARCOⅡ期18例30髋,给予ESWT治疗,并给予口服活血生骨汤,每日1剂;对照组男25例(45髋),女1例(1髋),年龄60-68岁,平均64.0岁,病程1-10月,平均3.7月,ARCO Ⅰ期7例12髋,ARCO Ⅱ期19例34髋,给予单纯ESWT治疗。两组一般资料比较差异不显著(P>0.05)。从治疗前后中医证候积分疗效及积分和Harris评分评价临床疗效,并抽取血清检测LDL、TG、BGP、IGF-1,并检测安全性指标。结果:治疗组4例和对照组2例因缺乏疗效或未能坚持用药及冲击波治疗脱落或剔除,其余50例(86髋)患者完成治疗,并获得随访,最少随访时间为12个月。治疗组中医证候疗效总有效率为90.0%,明显高于对照组78.3%(P<0.05),治疗组中医证候积分较对照组有显著性差异(P<0.01)。治疗6、12个月时,治疗组和对照组HHS较治疗前有显著性差异(P<0.01),两组间总体均值有显著性差异(F=26.863,P<0.01),治疗组HHS优于对照组,两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(F=17.046,P<0.01)。血清BGP的检验,治疗前两组差异不显著(P>0.05),治疗后两组较治疗前有显著性差异(P<0.05),两组总体均值有显著性差异(F=7.561,P<0.01),治疗组优于对照组,两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(F=10.752,P<0.01)。血清TG、LDL和IGF-1的检验,两组治疗前比较差异不显著(P>0.05),治疗后及治疗后6个月时治疗组与治疗前比较均有显著性差异(P<0.01),对照组与治疗前比较无显著差异(P>0.05),两组间TG、LDL、IGF-1总体均值有显著性差异(P<0.01),两组间均值差异与测量次数间有显著性交互效应(P<0.01)。治疗期间两组患者安全性指标未见异常。结论:活血生骨汤联合ESWT较单纯ESWT能明显改善老年早期肾虚血瘀型ONFH患者临床症状,其作用机制可能是有效调节了脂代谢及骨代谢水平,规避了塌陷发生危险因素,并增强了成骨细胞活动,提高了成骨能力。研究三活血生骨汤含药血清对DEX诱导的BMSCs分化的影响目的:通过活血生骨汤含药血清对DEX诱导的BMSCs干预,观察其对BMSCs的成骨成脂分化影响及其在Wnt/β-catenin通路上相关成脂成骨因子表达情况,探讨活血生骨汤对肾虚血瘀型ONFH的作用机制。方法:采用离体实验方法,取SD清洁大鼠,分离、培养、并鉴定其BMSCs,制备活血生骨汤含药血清,观察不同浓度的含药血清对BMSCs增殖的影响。DEX对BMSCs成脂诱导后,使用不同浓度的活血生骨汤含药血清干预,通过油红O和茜素红染色观察大体情况,通过检测细胞中TG、ALP含量,对干预后各组BMSCs成骨分化和成脂分化的情况得以细悉,使用PCR、Western Blotting等方法,观察BMSCs在Wnt/β-catenin通路相关因子的基因和蛋白表达情况,在分子和细胞水平探讨活血生骨汤治疗肾虚血瘀型ONFH的作用机制。结果:CCK-8实验结果显示:不同浓度的含药血清干预的BMSCs增殖能力均强于空白血清组(P<0.05)。在经含药血清干预后的成脂检测中:油红O实验中空白对照组未见红染,模型组和空白血清组均可见大片的红染,活血生骨汤含药血清各浓度组红染脂肪颗粒明显比模型组及空白血清组少,中浓度组的红染脂肪颗粒比低浓度组和高浓度组少。TG检测情况:活血生骨汤各浓度组与模型组相比均明显减少(P<0.01)。中浓度组含量最少,与低浓度组比较可见显著差异(P<0.05),与高浓度组比较差异不显著(P>0.05)。RT-PCR结果显示:活血生骨汤含药血清各浓度组DKK1和Sfrp1基因表达和模型组相比均明显减弱(P<0.05),中浓度组基因表达最弱,Sfrp1的表达中浓度组与高浓度组和低浓度组表达均可见显著差异(P<0.01),DKK1的表达中浓度组与低浓度组比较可见显著差异(P<0.01),与高浓度组比较差异不显著(P>0.05)。Western Blotting检测显示各浓度的活血生骨汤含药血清组DKK1和Sfrp1基因表达和模型组相比均明显减弱(P<0.01),中浓度组基因表达最弱,与高浓度组和低浓度组比较差异显著(P<0.01)。在经含药血清干预后的成骨检测中:茜素红实验中空白对照组、模型组和空白血清组均未见钙结节,各浓度的活血生骨汤含药血清组可见明显钙结节出现,其中中浓度组的钙结节数量比低浓度组和高浓度组多。ALP检测中各浓度活血生骨汤含药血清组较模型组比较均明显增多(P<0.01)。其中,中浓度组含量最多,与低浓度组比较可见显著差异(P<0.01),与高浓度组比较差异不显著(P>0.05)。RT-PCR结果显示:活血生骨汤含药血清各浓度组β-catenin和Wnt3a基因表达和模型组相比均明显增强(P<0.01),中浓度组基因表达最强,与高浓度组和低浓度组表达均可见显著差异(P<0.05),Western Blotting检测显示各浓度的活血生骨汤含药血清组β-catenin和Wnt3a基因表达和模型组相比均明显增强(P<0.01),中浓度组基因表达最强,与高浓度组和低浓度组比较差异显著(P<0.01)。结论:不同浓度的活血生骨汤含药血清是通过上调β-catenin和Wnt3a表达,下调DKK1和Sfrp1表达,进而促进Wnt/β-catenin信号通路的开放,从而发挥抑制BMSCs成脂分化,促进其成骨分化的作用。