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目的: 研究Hedgehog（Hh）信号转导通路相关因子和上皮细胞间质转化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）相关因子在B16黑色素瘤细胞中的表达及两者交互调节关系。 方法: 本研究用Hh信号转导通路抑制剂-环巴胺（Cyclopamine）处理小鼠黑色素瘤B16细胞，采用MTT法与软琼脂集落形成实验来检测细胞抑制率和克隆形成能力，用RT-PCR法和Western-Blot方法检测 Hh信号转导通路和EMT相关因子的mRNA和蛋白质表达水平。 结果: MTT结果显示：cyclopamine对B16细胞有抑制作用，且具有浓度依赖性。软琼脂集落形成实验结果显示Cyclopamine药物组对细胞的抑制率有明显的影响，且随着药物浓度的增加对细胞的抑制率增高。20μM组与0、2.5、5μM组相比，有显著性差异（p<0.05）,40、80μM组与20μM组比较，有显著性差异（p<0.05）。但是，40μM与80μM组相比，没有统计学意义（p=0.109）。 软琼脂集落形成实验结果显示：B16黑色素瘤细胞在20μM Cyclopamine药物组和10μM Cyclopamine药物组软琼脂中所形成的集落个数少于对照组软琼脂中的集落个数与5μM Cyclopamine药物组，且具有显著性差异(p<0.05)；而在5μM Cyclopamine药物组软琼脂中所形成的集落个数与对照组软琼脂中的集落个数无统计学差异(p>0.05)。且随着药物浓度的增高，B16黑色素瘤细胞所形成的集落个数降低。 RT-PCR24h结果显示：ihh mRNA在给予20μM cyclopamine药物组和5μM cyclopamine药物组的表达低于对照组。ptch mRNA在各药物组中的表达低于在对照组中的表达，而在20μM cyclopamine药物组的表达低于5μM cyclopamine药物组。twist mRNA在各药物组的表达低于对照组。vimentin mRNA在给予5μM cyclopamine药物组的表达高于20μM cyclopamine药物组。slug mRNA在各药物组表达低于对照组。e-cadherin mRNA在5μM cyclopamine药物组中的表达低于对照组，在20μM cyclopamine药物组中明显低于对照组的表达。48h结果显示：ihh mRNA在给予cyclopamine药物组中的表达低于对照组。smo mRNA在20μM cyclopamine药物组的表达高于5μM cyclopamine药物组和对照组。gli1 mRNA在20μM cyclopamine药物组中的表达低于其他药物组和对照组。vimentin mRNA在20μM cyclopamine药物组的表达高于其他药物组和对照组。slug mRNA在20μM cyclopamine的药物组中的表达高于其他药物组和对照组。e-cadherin mRNA在20μM cyclopamine药物组的表达高于5μM cyclopamine药物组和对照组。72h结果显示：ihh mRNA在cyclopamine各药物组中的表达均低于对照组。ptch mRNA在cyclopamine药物组的表达低于对照组，且20μM cyclopamine的药物组中的表达低于5μM cyclopamine药物组。smo mRNA在20μM cyclopamine药物组中和5μM cyclopamine药物组的表达低于对照组。vimentin mRNA在20μM cyclopamine的药物组中的表达低于5μM cyclopamine药物组和对照组。slug在20μM cyclopamine药物组中的表达低于对照组。 Western-Blot24h结果显示：gli1蛋白在各组之间无显著性差异。48h结果显示gli1蛋白在对照组中的表达高于20μM cyclopamine药物组和5μM cyclopamine药物组。 结论: 1. Cyclopamine对黑色素瘤B16细胞的生长有明显抑制作用。 2. gli1在中期（48h）的蛋白和mRNA的表达均明显下降。提示Cyclopamine抑制Hedgehog信号转导通路的第二信使作用。 3. Cyclopamine早期(24h)对黑色素瘤B16细胞ihh与ptch的表达有明显抑制作用，进而抑制 Hedgehog信号转导通路。其作用机制主要是通过抑制Hedgehog信号转导通路的信号启动环节与信号接收环节的终止来发生。 4. Cyclopamine在中期（48h）药物浓度为5μM-20μM范围内与晚期（72h）5μM-20μM范围内E-cadherin的表达增高，提示可能对EMT的发生有抑制作用。 5.早期（24h）与中期（48h）比较ptch与E-cadherin表达水平均增高。Ptch对E-cadherin表达可能有调节作用。其作用机制与相互关系有待于研究。