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脑血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高等特点,是威胁人类健康的最大杀手之一。据流行病学调查得知,全世界范围内脑血管疾病的发病率为140-200/10 万人口,其平均死亡率为 100/10 万人口。在我国脑血管病的死亡率从 1997年始已跃居各种疾病之首。而在脑血管疾病中缺血性脑血管病又占多数(约占其总数的 55~80%),因此研究缺血性脑血管病具有十分重要的意义。 近年来中医治疗中风病有了理论上的突破,在重视传统风、火、痰、虚、瘀等发病机理的基础上,随着对传统毒邪认识的深化,逐渐认识到毒邪与中风发病密切相关,许多证据表明内生毒邪对中风病的病理及预后有直接影响。采用解毒、排毒法治疗,提高中风病疗效,已成为现世医家在中风病病因学及治疗学研究中新的视点与热点。在这其中,相当多的学者认为热毒是中风病发病中的关键因素,清热解毒法治疗中风是值得深入探索的治疗方法。热毒(毒邪)的微观基础即为中风病级联反应中所产生的大量病理产物,因此探讨中风病发病过程中这些毒性产物的产生及其损害是临床与基础研究的关键,清热解毒药物对这些病理产物损伤的保护作用以及发挥作用的靶点则是解决这一理论问题的工作基础。 黄连解毒汤源于唐·王焘《外台秘要》,由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成,为清热解毒代表方。近年中日两国对黄连解毒汤及其提取物用于脑血管病的基础研究与临床报道较多,提示本方治疗缺血性脑血管病有良好前景。我们运用复方有效部位研究模式与方法,利用大孔树脂色谱技术分离制备了黄连解毒汤有效部位(HLJDTAF),并对该有效部位的药效药理进行了系统研究。1. 黄连解毒汤有效部位对实验性脑缺血的保护作用 实验采用三氯化铁制作大鼠大脑中动脉拴塞模型(MCAT),观察HLJDTAF对模型大鼠脑梗塞范围、神经症状的影响。结果表明:大脑中动脉栓塞后,脑组织缺血缺氧,最终出现脑梗塞、肢体偏瘫无力等神经症状,HLJDTAF0.6,0.3,0.15g·kg-1组均可减小模型大鼠脑梗塞范围,抑制率分别为 49.7%,70%,42.1%;HLJDTAF各剂量还能不同程度改善神经症状。表明HLJDTAF对局灶性脑缺血损伤有明显的治疗作用。 采用大鼠单侧颈总动脉注射同源血粉的方法建立多发性脑梗塞模型,观察HLJDTAF对模型大鼠病理组织学的影响。结果显示:模型组脑组织患侧脑肿胀,中线向健侧膨出,患侧脑组织弥漫变性,部分区域形成坏死灶,病变细胞细胞核固缩深染,形态不规则,部分细胞核周围出现核周空泡,胞浆稀疏淡染,甚至空泡形成,部分血管管腔内可见血栓。HLJDTAF0.6,0.3,0.15g·kg-1组脑患侧脑肿胀明显减轻,变性程度及范围明显缩小,坏死灶数量减少且面积减小,正常细胞与模型组相比数量明显<WP=5>2 黄连解毒汤有效部位对实验性脑缺血的保护作用及机理研究增多,胞浆较模型组丰富深染,于血管内未见血栓。表明HLJDTAF对多发性脑梗塞损伤有明显的治疗作用。 采用大鼠双侧颈总动脉结扎模型(CCAO)合并静注EB研究药物对脑毛细血管通透性的影响。结果显示:模型组大鼠脑组织EB渗出量明显高于假手术组(p<0.01),HLJDTAF0.3、0.15g·kg-1组EB渗出量明显低于模型组(p<0.05;p<0.01)。 采用小鼠双侧颈总动脉反复缺血再灌注模型(CCAORR)观察药物的作用。结果表明:HLJDTAF0.86、0.43 g·kg-1可显著延长模型小鼠断头喘气时间、降低脑指数和脑含水量,0.22 g·kg-1也可显著延长模型小鼠断头喘气时间、降低脑含水量(p<0.05;p<0.01)。 2. 黄连解毒汤有效部位对小鼠缺氧损伤的保护作用 HLJDTAF0.86、0.43、0.22g·kg-1可明显延长小鼠常压密闭状态下的存活时间(与对照组比较p<0.05);0.22g·kg-1可明显延长小鼠亚硝酸钠中毒缺氧存活时间(与对照组比较p<0.05);HLJDTAF0.86g·kg-1、0.43g·kg-1、0.22g·kg-1可明显延长正常小鼠断头张口喘气时间(与对照组比较P<0.05;p<0.01) 3. 黄连解毒汤有效部位对多发性脑梗塞大鼠脑组织酸中毒、能量代谢及自由基代谢的影响 采用大鼠MCI模型观察HLJDTAF作用,结果表明:模型大鼠脑组织中LA含量明显增加,LDH、Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶、CAT、GSH-ST、SOD和Cu-ZnSOD活性明显降低,MDA含量显著升高,(与对照组比p<0.05,p<0.01),HLJDTAF0.6、0.3g·kg-1组可显著降低多发性脑梗塞大鼠脑组织中LA含量,提高LDH活性,提高Na+-K+ATP酶活性,0.15g·kg-1并可提高LDH与Na+-K+ATP酶活性(p<0.05;p<0.01);HLJDTAF 0.6、0.3、0.15g·kg-1均可提高模型动物脑组织CAT和GSH-PX活性;HLJDTAF0.3g·kg-1可提高模型大鼠GSH-ST活性(p<0.05;p<0.01);HLJDTAF 0.6、0.3、0.15g·kg-1均能提高还原型谷胱甘肽含量;HLJDTAF0.15g·kg-1还可显著提高模型动物脑组织SOD和Cu-ZnSOD活性,降低MDA含量(p<0.05;p<0.01)。 4. 黄连解毒汤有效部位对原代培养皮层神经细胞缺糖缺氧、谷氨酸、NO 和自由基损伤的保护作用 4.1HLJIDTAF 对缺糖/缺氧诱导原代培养神经细胞拟缺血损伤的保护作用 体外培养大鼠皮层神经细胞,以缺氧加缺糖培养建立神经细胞“缺血”性损伤模型,观察HLJDTAF对培养神经细胞“缺血”性损伤的保护作用?