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目的:金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcus aureus entertoxin B,SEB)刺激HaCaT细胞,体外测定细胞内外S100A8、S100A9蛋白及细胞外白细胞介素-1α(Interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达情况。在体外SEB刺激HaCaT细胞后探讨细胞内外S100A8、S100A9蛋白在特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)发病过程中的重要作用及IL-1α和IL-17与AD发病的相关性。为明确在机体组织损伤相关分子模式(Damage associated molecular patterns,DAMP)与先天免疫对AD发病的影响。方法:采用细胞复苏、传代、冻存等基本细胞培养方法培养HaCaT细胞。取处于对数生长期3～5代的HaCaT细胞用于实验。使用MTT法测定0、20、50、100、200、500、1000、5000、10000 ng/ml SEB 对 HaCaT 细胞的细胞毒性。选择0、20、50、100 ng/ml SEB刺激浓度通过Western blot分别测定48h细胞内外DAMP分子S100A8、S100A9蛋白的表达。体外不同浓度SEB刺激HaCaT细胞48h后通过酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别测定 IL-1α、IL-17、TNF-α 及 IL-4 的表达。结果:1.MTT法结果显示24h时不同浓度SEB对HaCaT细胞无细胞毒性,差异无统计意义(P>0.05)。不同浓度SEB刺激HaCaT细胞48h和72h时同样对HaCaT细胞无细胞毒性,差异无统计意义(P>0.05)。2.Western blot 结果显示 20 ng/ml SEB 组、50 ng/ml SEB 组、100 ng/ml SEB 组分别与对照组比较,细胞内S100A8蛋白的表达升高(P<0.01)。通过Western blot方法检测细胞外S100A8蛋白的表达情况。结果发现20 ng/ml SEB组与对照组比较,细胞外S100A8蛋白的表达升高(P<0.01)。采用Western blot方法检测细胞内外S100A9蛋白的表达情况。结果发现20 ng/ml SEB组与对照组比较,细胞内S100A9蛋白的表达升高(P<0.01)。同样细胞外S100A9蛋白的表达升高(P<0.01)。其中值得我们注意的是SEB浓度在20 ng/ml时细胞内外S100A8和S100A9蛋白表达量显著增加。3.通过ELISA方法测定不同浓度SEB处理下IL-1α表达量呈上升趋势,各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。ELISA结果显示100ng/m1 SEB组与对照组比较,IL-17表达明显升高(P<0.01)。TNF-α,IL-4在HaCaT细胞中不表达。结论:1.SEB通过刺激HaCaT细胞,促进AD发病机制中S100A8、S100A9蛋白的表达,表明DAMP分子S100A8和S100A9蛋白的变化可能影响AD的发病。2.SEB通过刺激HaCaT细胞,促进AD发病机制中IL-1α和IL-17的分泌,表明IL-1α、IL-17炎症因子加重皮肤炎症,可能导致AD的发病。