猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumonia,APP）引起的猪的重要呼吸道传染病,能引起猪的急性死亡,以出血性纤维素性胸膜肺炎和坏死性胸膜肺炎为主要特征,给我国和世界养猪业都造成了重大的经济损失。APP的四种Apx外毒素属于RTX毒素家族,是APP引起宿主组织损伤和急性死亡最重要的毒力因子,具有不同程度的溶血活性和细胞毒性。但关于Apx毒素与宿主细胞互作的机制尚未解释清楚。近年来的研究发现,Apx毒素除了能直接导致细胞坏死之外,Apx I还能引起宿主细胞的凋亡。此外,整合素亚单位CD18可能是Apx I和Apx ⅡI在宿主细胞上的受体。Apx Ⅱ在APP大多数血清型中都存在,关于Apx Ⅱ对宿主细胞的作用机制及影响的细胞内信号通路都未见报道。因此,本研究纯化了天然毒素Apx Ⅱ,从浓度和时间依赖性及翻译后修饰的依赖性等方面研究了其引起宿主细胞死亡的方式,解析了其影响的细胞内信号通路,筛选了Apx Ⅱ在宿主细胞表面的可能受体,为Apx毒素与宿主细胞相互作用的机制提供了新的依据。取得的主要研究结果如下:1、在大肠杆菌中表达纯化了Apx Ⅱ,制备了该毒素的多克隆抗体,但重组毒素在不同表达载体中均以包涵体形式存在,不具备溶血活性和细胞毒性。2、从只分泌Apx Ⅱ的APP血清7型标准菌株中提取了天然毒素Apx Ⅱ,验证了高浓度的天然毒素Apx Ⅱ作用猪肺泡巨噬细胞时引起细胞坏死和凋亡,而低浓度的天然毒素Apx Ⅱ诱导猪肺泡巨噬细胞发生凋亡。进一步构建了缺失Apx Ⅱ脂酰化修饰基因的缺失突变体,从中提取了非脂酰化修饰的Apx Ⅱ,验证了脂酰化修饰对Apx Ⅱ的溶血活性、细胞毒性及引起细胞凋亡都是必需的。3、脂酰化修饰的天然毒素Apx Ⅱ能激活线粒体途径诱导猪肺泡巨噬细胞凋亡,而非脂酰化修饰的毒素Apx Ⅱ不能激活这些信号通路。4、通过免疫共沉淀和质谱分析,初步获得了脂酰化修饰的高浓度和低浓度天然毒素Apx Ⅱ与肺泡巨噬细胞互作的凋亡相关蛋白各5个。5、通过蛋白组学分析,发现低浓度脂酰化修饰的天然毒素Apx Ⅱ下调了猪肺巨噬细胞的碳代谢、糖酵解、丙酮酸代谢等8条代谢相关信号通路,并影响了细胞自噬、坏死性凋亡等4条细胞死亡信号通路。