原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第五大常见的恶性肿瘤，在肿瘤致死的病因中排名第三位。在全球，每年有超过50万人死于肝癌，且一半以上在中国。随着科学研究的发展，科研人员发现肝癌的发生发展不仅仅是病毒感染、环境因素、基因突变这些因素，肿瘤微环境对肿瘤的发生、发展、复发转移有着重要作用。肝脏是一个具有“免疫特赦”的脏器，肝癌微环境中的非实质细胞及其细胞因子是肝癌的免疫逃逸，复发转移的重要因素。　　肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSCs）是肝癌微环境中重要的非实质细胞。活化的星状细胞具有免疫调节能力，能够诱导免疫抑制细胞的产生，促进肝癌的发生、发展、复发转移。髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell，MDSCs)是具有免疫负调控作用的免疫抑制细胞，是近年来研究的热点。前期研究发现活化的星状细胞能促进肝癌的发生发展，促进肝癌中MDSCs的蓄积。然而在活化的HSCs诱导MDSCs在肝癌微环境中蓄积的机制并不清楚。本文能过以下三个部分研究进行探讨和阐述。　　第一部分 髓系来源抑制性细胞及其亚群的分选　　本章首先通过流式分选方法对比不同的流式抗体分选荷瘤小鼠骨髓中的MDSCs的可行性。我们单标APC-CD11b或PE-Gr-1或双标APC-CD11b，PE-Gr-1，对比其分选后的细胞纯度和细胞活力，发现三各方法分选得到的细胞90％以上为CD11b+Gr-1+的细胞，即MDSCs，且其细胞活力都达95％以上。然而用CD11b单色标记分选MDSCs既可以满足实验对细胞纯度和活力的要求，又重复性高，减少荧光素染料对后续实验的干扰，同时也节省资源。　　为了进一步研究MDSCs亚群，我们还建立不同的方法分选荷瘤小鼠脾脏中PMN-MDSCs和Mo-MDSCs。应用流式和磁珠分选的方法都能得到高纯度和高活力的PMN-MDSCs和Mo-MDSCs。而PMN-MDSCs在脾脏中比例较高，流式分选会更节省资源。而Mo-MDSCs在脾脏中比例很少，则选用磁珠分选的方法可以更省时间。本部分研究提供了MDSCs及亚群的分选方法，为后续HSCs对MDSCs作用的机制研究奠定了基础。　　第二部分 活化的肝星状细胞促进髓系来源抑制性细胞扩增的机制研究　　在体外，HSCs条件培养基诱导骨髓细胞向MDSCs分化，促进PMN-MDSCs和Mo-MDSCs的扩增。用COX2抑制剂处理HSCs和EP4抑制剂抑制骨髓细胞的PGE2受体， HSCs细胞的上清不能诱导MDSCs及PMN-MDSCs的扩增，证明HSCs通过分泌PGE2/EP4诱导MDSCs及的扩增。在体内小鼠肝癌模型中，我们用COX2抑制剂处理的HSCs与肝癌细胞共移植，HSCs促进肿瘤生长的能力减弱，HSCs诱导脾脏和肿瘤中的MDSCs及其亚群的能力均减弱。研究结果表明HSCs通过PGE2/EP4通路诱导MDSCs及其亚群的扩增，为肝癌的免疫治疗提供新的理论基础。本研究首次探讨了肝癌微环境中HSCs与MDSCs及亚群的关系。　　第三部分 活化的肝星状细胞促进髓系来源抑制性细胞迁移及其机制研究　　本章通过用HSCs条件培养基诱导荷瘤小鼠脾细胞迁移，证明了活化的肝星状细胞对荷瘤小鼠脾脏细胞中MDSCs有显著性的趋化作用，且HSCs条件培养基能显著升高Mo-MDSCs的趋化能力。蛋白芯片分析HSCs条件培养基中趋化因子的表达情况，结果表明HSCs主要含有趋化因子CCL2，SDF-1，CXCL1，CXCL5。进一步分选PMN-MDSCs和Mo-MDSCs用PCR基因芯片分析其趋化因子及受体的表达情况，结果发现CCL2的受体CCR2在Mo-MDSCs的表达比PMN-MDSCs高了515.5倍，而CXCL1，CXCL5的受体CXCR2则主要表达在PMN-MDSCs，SDF-1受体CXCR4在PMN-MDSCs和Mo-MDSCs上都高表达。进一步我们用分别这些趋化因子中和抗体和受体的拮抗剂处理HSCs条件培养基和MDSCs，结果表明只有SDF-1中和抗体和CXCR4拮抗剂能阻断HSCs件培养基对MDSCs的迁移作用。本研究表明了HSCs可能通过分泌SDF-1作用于MDSCs的CXCR4受体促进MDSCs的迁移。为HSCs促进肿瘤中MDSCs的蓄积提供新的理论基础。