【摘 要】
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γ-干扰素(IFN-γ)是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。γ-干扰素主要由激活的T细胞、激活的NK细胞和巨噬细胞产生。研究表明，内源性IFN-γ水平的高低
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γ-干扰素(IFN-γ)是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。γ-干扰素主要由激活的T细胞、激活的NK细胞和巨噬细胞产生。研究表明，内源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态，对样本中的IFN-γ进行定量分析，在免疫机制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等方面都具有极其重要的理论价值和应用价值。 本研究利用在大肠埃希氏菌中表达的重组猪γ-干扰素(rpIFN-γ)免疫8周龄BALB／c鼠3次后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞按标准程序融合后，以间接ELISA和有限稀释法进行筛选，获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该株单克隆抗体命名为B11株。同时将rpIFN-γ免疫产蛋鸡4次后，收集鸡蛋并分离卵黄，经过氯仿抽提和硫酸氨沉淀，获得卵黄抗体(IgY)粗品。将纯化的rpIFN-γ偶联于溴化氰活化的葡聚糖凝胶4B上，利用免疫亲和层析进一步纯化抗原特异性IgY并用生物素标记，经HABA法测定，每个IgY分子标记4.37个生物素分子。应用亲和纯化的抗猪γ-干扰素单克隆抗体作为捕获抗体，生物素标记的卵黄抗体作为检测抗体，经方阵试验优化抗原捕获ELISA反应体系，利用重组猪γ-干扰素绘制OD值-抗原浓度标准曲线，确定检测灵敏度为7.8ng／mL。本实验初步建立了猪γ-干扰素定量抗原捕获ELISA检测方法，为进一步建立猪γ-干扰素的ELISPOT检测方法奠定坚实的基础。
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