目的：利用组织培养技术培育出冬凌草无菌苗,以无菌苗株高、茎粗、叶片数等农艺学性状及冬凌草甲素含量为指标,通过系统有效的人工定向选择,筛选出优质高产冬凌草无性株系,为冬凌草优良品种的选育奠定基础。 　　探讨稀土元素镧、铈对冬凌草组织培养及冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸、微量元素含量的影响,改良冬凌草组织培养培养基,为进一步提高所筛选出的优良冬凌草的品质奠定基础。 　　方法：首先初步选出冬凌草甲素含量较高、品质优良的三个冬凌草产地,以三个产地冬凌草种子为材料,利用组织培养技术培育出冬凌草无菌苗,对三个产地冬凌草无菌苗的性状、产量、质量进行综合加权评分,根据评分高低再次筛选冬凌草品质优良的产地。以冬凌草株高、茎粗、叶片数等农艺学性状为指标,采用系统选育法,逐级筛选该产地优良单株,再以产量及甲素含量为指标,对初选的优良单株进行产量及质量评价,最终筛选出优质冬凌草无性株系。 　　在冬凌草组织培养不同时期,分别添加不同浓度的稀土元素镧、铈,以外观性状、产量及冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量为指标,采用重量法测定鲜重、绘制生长曲线,HPLC 法测定冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量,并对其进行综合评价。 　　结果及结论： 　　实验一 优质冬凌草无性株系筛选的研究 　　济源、常家岭、茨庙冬凌草无菌苗的综合评分范围在 69.60~86.30 分,常家岭总分最高为86.30分,其次济源为75.60分,茨庙最低为69.60分。济源冬凌草甲素含量最高为 7.50mg/g,因此选出济源、常家岭产地的冬凌草做进一步优质冬凌草无性株系的筛选。冬凌草再生植株最佳采集时间为第35天。 　　根据优良种质评价结果,在济源、常家岭无菌苗中筛选了植株高大、健壮、颜色浓绿等外观性状良好的84株冬凌草,以产量、冬凌草甲素含量为筛选指标,进行优良株系的初步筛选研究,得到 56 株优良单株。单株产量均大于 0.07g,冬凌草甲素含量均大于7.50mg/g。通过分组,可得到―极高产高含、极高产中含、高产高含、高产中含、中产高含、中产中含、极高含‖7个优良株系。 　　实验二 稀土元素铈对冬凌草愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响 　　冬凌草愈伤组织中甲素含量为0,稀土元素镧、铈不具有促进愈伤组织合成甲素的作用。镧、铈均能促进冬凌草生物量积累及冬凌草乙素、迷迭香酸的合成。铈对冬凌草愈伤组织生物量及冬凌草乙素的促进作用优于镧,镧对迷迭香酸的促进作用优于铈。1.0μmol/LCeCl3·7H2O条件下愈伤生物量最高,是空白条件下的2.4倍。10.0μmol/LCeCl3·7H2O条件下乙素含量最高,达5.80mg/g。5.0μmol/LLaCl3·6H2O条件下,迷迭香酸含量最高,达14.20mg/g,空白条件下的含量为6.60mg/g。 　　实验三 稀土元素对冬凌草不定芽的分化及再生植株的影响 　　1μmol/L~10μmol/LCeCl3·7H2O不但加快冬凌草不定芽分化速度,同时也提高了不定芽诱导率及分化数量。培养基中添加 CeCl3·7H2O 的愈伤组织 13~15 天开始发芽,比空白对照组提前5~7天,不定芽诱导率及分化数量明显高于空白对照组,其中 1μmol/LCeCl3·7H2O 条件下,不定芽诱导率最高为 82%,总芽数最高为153个。 　　不同稀土元素条件下,不同农艺性状、产量及含量之间的差异性各不相同,冬凌草各农艺性状之间、地上部分各性状与鲜重之间均呈显著性正相关。综合评分结果显示,CeCl3·7H2O对冬凌草再生植株的促进作用优于LaCl3·6H2O,空白对照组综合评分为63.49分,1μmol/LCeCl3·7H2O条件下,评分最高为87.20分,高于空白对照组23.61分,1μmol/LCeCl3·7H2O为稀土元素最佳条件选择。 　　稀土元素对不同微量元素影响各不相同,镧、铈均不同程度促进冬凌草对镁元素、锰元素吸收,促进作用随着镧、铈浓度的升高而增强；镧、铈均不同程度抑制铁元素的含量,抑制作用随着镧、铈浓度的升高而增强；铈同时抑制冬凌草对锌元素的吸收,镧对冬凌草吸收锌元素影响不大；镧、铈对钾元素及钙元素含量影响不大。