背景:胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤和癌症相关死亡的第三大常见原因,占癌症相关死亡人数的10.4%。据统计,仅2008年,全世界共有989600个新发胃癌病例和738000个死亡病例。其中,约40%的新发病例发生在中国。不幸的是,大多数胃癌患者诊断时即为疾病的晚期,失去根治性手术的机会,治疗局限于化疗,预后较差。因此,筛选与胃癌发生发展密切相关的功能性基因,为分子靶向治疗提供新的靶点及理论依据,对于胃癌的治疗具有重要意义。活化的C激酶1受体(Receptor of activated C-kinase 1,RACK1),也被称为GNB2L1,是由鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)类似物GNB2L1基因编码,定位于人类第5号染色体的q35.3区,分子量36k Da的胞浆蛋白。RACK1蛋白结构中包含7个色氨酸-天门冬氨酸(WD)结构的重复序列,这种结构有利于RACK1与其他蛋白结合,RACK1通过与多种信号转导通路蛋白而结合发挥生物学作用,包括激酶、磷酸酶、磷酸二酯酶、离子通道、膜受体、G蛋白、IP3受体、凋亡相关分子以及和核糖体相关的结构蛋白等。RACK1被看作是一个影响多种信号转导途径的平台,在细胞生长、迁移、分化、信号转导和免疫应答等方面发挥作用。研究发现,RACK1在细胞生长及细胞凋亡中发挥着双向调节作用,因此,RACK1异常表达可以引起细胞生理功能的异常改变,从而导致肿瘤的发生。在肿瘤研究中,RACK1被发现参与肿瘤细胞分裂、侵袭和迁移等过程中,并且在不同肿瘤中的表达具有肿瘤特异性,如RACK1作为癌基因在肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、食管癌中高表达,而在胃癌中则呈低表达状态。我们通过对RACK1与实体瘤预后的meta分析得出,RACK1是实体肿瘤的一个潜在预后因子,其高表达提示肿瘤预后不良,但在仅纳入meta分析的唯一一篇关于胃癌的研究中,RACK1高表达却提示着肿瘤预后良好,这与其它实体瘤meta分析得出的总的结论相反。我们又进一步通过公共数据库分析发现RACK1在胃癌中表达是下调的,并且通过在GEO数据库的分析中发现其表达与胃癌预后正相关。目前关于RACK1与胃癌关系的研究尚少,其对胃癌影响的机制研究尚不充分,RACK1与自噬关系的研究未见报道。本研究拟检测RACK1对于胃癌细胞生物学行为的影响,从自噬的角度探讨其作用机制。研究方法:1、利用计算机检索Pub Med、The Cochrane Library和Web of Science数据库2018年2月16日之前的文献,收集RACK1表达在实体肿瘤中与预后及相关临床病理特征关系的研究,主要结局指标包含总生存期(OS)、淋巴结转移、临床分期、远处转移和分化水平五个方面;以风险比(HR)和比值比(OR)为效应量,各效应量以95可信区间(CI)表示,采用STATA 12.0统计软件进行Meta分析。2、收集中国医科大学附属第一医院胃肠肿瘤外科手术切除胃癌组织及其配对正常胃粘膜组织30例,提取RNA及蛋白,采用Realtime-PCR和Western Blot方法检测胃癌组织及其正常胃粘膜组织中RACK1的m RNA和蛋白的表达情况。利用公共数据库(GEO/TCGA)分析RACK1在胃癌中m RNA表达情况及其对预后的影响。3、采用划痕愈合实验、Transwell迁移、侵袭实验评价过表达RACK1基因对胃癌细胞系BGC823和HGC27细胞迁移、侵袭能力的影响。采用流式细胞术进行细胞周期检测分析过表达RACK1对BGC823和HGC27细胞周期的影响。采用克隆形成及MTT法评估过表达RACK1对BGC823和HGC27细胞增殖活性的影响。4、通过裸鼠皮下移植瘤实验评估过表达RACK1的胃癌细胞系BGC823体内增殖能力。通过Western blot方法评价RACK1基因过表达对EMT信号通路蛋白、自噬相关蛋白及AKT/m TOR通路的影响。结果:1、meta分析结果发现在实体肿瘤中,RACK1高表达患者发生死亡的风险是RACK1低表达表达患者的1.69倍HR(1.69,95%CI:1.26-2.27,P<0.001)。2、通过Realtime-PCR、Western Blot方法对30例胃癌组织及配对正常胃粘膜组织中RACK1表达情况进行检测,结果发现RACK1蛋白在胃癌组织中的m RNA和蛋白表达量显著低于配对正常胃粘膜组织(P<0.05)。利用公共数据库(GEO)对876例胃癌患者RACK1的表达与预后进行了统计学分析,结果发现RACK1表达与预后显著相关。3、在BGC823和HGC27细胞系中过表达RACK1后通过平板克隆形成实验和MTT增殖实验发现过表达RACK1基因后胃癌细胞增殖活性下降,通过Transwell和细胞划痕实验发现过表达RACK1基因细胞迁移、侵袭能力下降。通过流式细胞术检测发现RACK1过表达可使细胞阻滞于G0/G1期。4、裸小鼠皮下移植瘤实验结果显示,RACK1过表达后,RACK1-BGC82胃癌细胞的裸鼠皮下移植瘤的成瘤率下降,瘤重及瘤体积显著低于对照组(P<0.05)。通过Western Blot实验检测RACK1过表达可使E-cadherin表达量上调,Vimentin表达量减少。自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin1表达量增加,p62、p-AKT、p-m TOR的表达量减少。结论:1、RACK1可以看作为实体肿瘤的一个潜在预后因子。2、RACK1在胃癌组织中呈低表达,并与预后显著相关。3、RACK1基因过表达可能通过EMT而抑制BGC823和HGC27胃癌细胞的迁移与侵袭能力。4、RACK1基因过表达可能通过抑制AKT/m TOR通路而增加BGC823和HGC27胃癌细胞的自噬。