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研究目的苗药三两银为黄杨科野扇花属植物野扇花(Sarcococca ruscifolia Stapf.)的根。本课题组前期研究表明三两银总生物碱具有较好的药理活性和应用前景,然而有关三两银总生物碱的毒性尚待评估。因此,为了确保其临床用药安全,充分挖掘和发挥苗药三两银的药用价值,本研究拟对三两银总碱进行了急性毒性、亚急性毒性以及长期毒性实验研究。研究方法本实验全部采用灌胃途径给药。实验时采用寇氏法测定LD50;直接观察不同剂量组对实验动物行为指标的影响;定时测量体重、摄食量、饮水量及脏器湿重,并计算脏器系数;利用全自动生化分析仪测定血液的生化指标,利用血液检测分析仪检测血液生理指标;利用HE染色法制作病理组织学切片,并用荧光显微镜观察切片的病理情况。此外,利用半定量的方法表示病理组织变化的严重程度。实验结果的所有统计均在SPSS软件中完成。研究结果通过实验,本研究得到以下结果:(一)急性毒性实验三两银总碱 LD50为237.69mg·kg-1,95%可信限为202.05mg.k-1-279.62mg.kg-1。行为观察发现小鼠出现精神萎靡、被毛色泽差、部分举尾的症状、焦躁不安、腹部抽搐症状,且小鼠死亡率较高。结果发现实验组小鼠体重明显低于对照组(P<0.05)。组织病理学检测发现肝主要出现不同程度的水肿,部分肾组织出现肾小管上皮细胞轻度水肿,然而各组小鼠心肌组织均正常。(二)亚急性毒性实验(1)实验结果表明高、中剂量组小鼠部分的毒性反应表现为精神萎靡、被毛杂乱、下泻,并且发现高剂量组小鼠死亡3只、中剂量组小鼠死亡2只。(2)实验结果表明高剂量组小鼠在第1-4周体重明显低于对照组(P<0.05),中剂量组小鼠仅在第1周明显低于对照组(P<0.05);高剂量组肌酐、谷丙转氨酶的浓度明显高于对照组(P<0.05),而总胆红素的浓度明显低于对照组(P<0.05);中剂量组谷丙转氨酶的浓度明显高于与对照组(P<0.05);低剂量组总胆红素浓度明显低于对照组(P<0.05)。(3)病理学观察结果发现肝、肾总体损伤的严重程度依次表现为高剂量组>中剂量组>低剂量组,其中高剂量组部分肝组织出现不同程度的水肿;部分肾组织出现肾小管上皮轻度水肿,而未发现对心、脾、肺、脑组织的明显病理影响。(三)长期毒性实验(1)实验结果表明高、中剂量组部分大鼠出现精神萎靡、被毛杂乱、下泻、眼角具分泌物的短期毒性表现,此外还发现高剂量组死亡9只,中剂量组死亡1只。(2)实验中期高剂量组饮水量明显低于对照组(P<0.05),此时期内中剂量组第4周饮水量明显低于对照组(P<0.05);实验末期高剂量组饮水量明显低于对照组(P<0.05),此时期内中剂量组第7、10、11周饮水量明显低于对照组(P<0.05);恢复期饮水量实验组与对照组均无明显差异(P>0.05)。(3)实验中期高剂量组摄食量在各周明显低于对照组(P<0.05),中剂量组第2、3周摄食量明显低于对照组(P<0.05);实验末期高剂量组摄食量明显低于对照组(P<0.05);恢复期各组摄食量均无明显差异。(4)实验中期高剂量组体重在各周均有明显低于对照组(P<0.05);中剂量组在第2-4周的体重明显低于对照组(P<0.05);低剂量组在第2周的体重明显低于对照组(P<0.05)。实验末期高剂量组体重在各周明显低于对照组(P<0.05)。实验恢复期各组体重均无显著差异。(5)实验结果表明实验中期高剂量组大鼠肌酐、谷丙转氨酶、总胆红素、甘油三酯浓度明显低于对照组(P<0.05);中、低剂量组肌酐、总胆红素浓度明显低于对照组(P<0.05)。实验末期高剂量组大鼠的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、甘油三酯、葡萄糖的浓度均明显低于对照组(P<0.05),而肌酐明显高于对照组(P<0.05);中剂量组肌酐、谷丙转氨酶、甘油三酯的浓度均明显低于对照组(P<0.05);低剂量组肌酐的浓度明显低于对照组(P<0.05)。恢复期高、中、低剂量组各生化指标与对照组均无显著差异。(6)实验中期、实验末期高、中、低剂量组与对照组比较各血液学指标均无显著差异。而实验恢复期各剂量组血小板(PLT)浓度均低于对照组(P<0.05)。(7)实验中期高剂量组心、肝、脾、肺、肾脏器系数均明显高于对照组(P<0.05);中剂量组肺、肾脏器系数均明显高于对照组(P<0.05);低剂量组肺脏器系数明显高于对照组(P<0.05)。实验末期高剂量组肝、肺、肾脏器系数明显高于对照组;中、低剂量组肺、肾脏器系数明显高于对照组(P<0.05)。恢复期高、中、低剂量组各脏器系数与对照组均无显著差异。(8)实验中期肾组织高、中、低剂量组主要表现为肾小管上皮轻度水肿,末期高、中剂量组表现为肾小管上皮水肿,经过恢复期肾小管上皮水肿得到明显缓解。实验中期肝组织高剂量组表现为轻、中、重度水肿,中、低剂量组表现为轻度水肿,末期肝组织高、中剂量组表现为重、中度水肿,低剂量组表现为轻度水肿,经过恢复期病变程度得到明显缓解。此外,脑组织在实验各期均未出现病理变化。结论:通过本研究,三两银总碱对小鼠的LD50为237.69mg·kg-1,95%可信限为202.05mg-k-1～279.62mg·kg-1;随着三两银总碱剂量的增加,肝、肾的毒性反应增强,心、脑无明显的毒性反应,但是三两银总碱对肝肾的损伤具有明显的可逆性。