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目的:研究血小板裂解液(platelet lysate,PL)对人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSC)和脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cell,ATMSC)的生物学特性的影响,为临床细胞治疗及再生医学提供科学的实验数据。方法:1、采集新鲜血液,通过反复冻融法获得PL。2、采集健康成人骨髓和脂肪组织,分别采用密度梯度离心法和I型胶原酶消化法联合细胞贴壁筛选法,分离得到原代培养的BMMSC和ATMSC。3、采用PL培养原代BMMSC和ATMSC。4、采用倒置相差显微镜观察BMMSC和ATMSC的形态。5、采用流式细胞仪检测鉴定PL培养的BMMSC和ATMSC的CD13、CD29、CD90、CD105、CD14、CD19、CD45、CD34、HLA-ABC及HLA-DR表达变化。6、采用细胞计数法分别计算出每一代BMMSC和ATMSC的细胞累积群倍数,检测细胞的增殖能力。7、采用体外集落形成实验检测BMMSC和ATMSC集落形成能力。8、采用阿利新蓝染色法、茜素红染色法和油红-O染色法分别检测BMMSC和ATMSC的成软骨、成骨和成脂肪的分化能力。9、采用ELISA方法检测BMMSC和ATMSC分泌细胞因子IL-6、TNF-α、IL-8及VEGF的水平。结果:1、经PL培养的人BMMSC和ATMSC均呈现较均一的形态特征,细胞长梭形,并呈漩涡状生长及平行排列生长。2、流式细胞术检测结果显示BMMSC和ATMSC具有相似的细胞表型(p>0.05),CD13、CD29、CD90、CD105及HLA-ABC均呈现阳性表达,CD14、CD19、CD45、CD34及HLA-DR均呈现阴性表达。3、细胞增殖能力检测显示经P1~P5的培养ATMSC比BMMSC有更高的细胞累积群倍数(p<0.05)。4、人BMMSC和ATMSC集落形成能力检测(p>0.05),无统计学差异。5、体外诱导分化试验显示BMMSC和ATMSC均具有成软骨、成骨和成脂肪分化能力。6、人BMMSC和ATMSC均分泌IL-6、TNF-α、IL-8及VEGF,无统计学差异(p>0.05)。结论:应用PL在体外成功地培养扩增了BMMSC和ATMSC。经PL培养的BMMSC和ATMSC均具有成软骨、成骨和成脂肪分化能力。BMMSC和ATMSC在细胞形态、细胞表型、集落形成能力和细胞因子分泌水平等生物学特性方面无明显差异。ATMSC比BMMSC有更高的细胞累积群倍数,ATMSC在体外PL培养体系下更适宜进行大规模的扩增。本实验建立的PL培养体系为ATMSC和BMMSC的体外扩增提供了安全和有效的方法。