论文部分内容阅读
胃癌(Gastric carcinoma,GC),主要是指胃腺癌,在上消化道的恶性肿瘤中较为常见。根据2009~2011年中国流行病学统计结果预测胃癌在全国恶性肿瘤中的发病率和死亡率均位居第2位。虽然早期胃癌的临床表现不具有特征性,但随着人们健康意识的增强以及当今腔镜水平与诊断水平的提高,早期胃癌的诊断概率得到明显提高。这不仅延长了胃癌患者的生存时间,还相应地提高了胃癌患者的生活质量。而在精准医疗的推动下,从胃癌发生的源头,即分子水平防止胃癌的发生已成为当前科学研究的重中之重。在一些致癌因素的作用和影响下,基因组的稳定性减弱:癌基因活性增强,抑癌基因活性减弱以及肿瘤易感基因的突变,这些均能引起细胞蛋白质表达谱的改变,进而诱导肿瘤发生。microRNAs在肿瘤的发生发展中作用明显,其发挥作用的原理与调控靶基因的机制已得到大量研究证实。β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅲ(B4GALT3)是B4GALT家族的第3个成员,是合成多聚-N-乙酰氨基乳糖的关键酶,而多聚-N-乙酰氨基乳糖被修饰后表达肿瘤相关抗原。至今,B4GALT3在胃癌细胞中的表达以及对胃癌细胞生物学行为的影响尚一无所知。 目的:探讨miR-27a-3p对B4GALT3表达水平的影响以及对胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响,为进一步研究B4GALT3对胃癌细胞生物学行为的影响奠定基础。 方法:用Western blot检测B4GALT3蛋白在胃癌细胞——SGC-7901(中分化)、MGC-803(低分化)、BGC-823(低分化)与正常胃粘膜细胞(GES-1)中的表达情况;运用生物信息学方法获取与B4GALT3靶向结合的最佳miRNA。通过瞬时转染,上调/下调BGC-823细胞中的miR-27a-3p水平后,用Western blot检测B4GALT3蛋白在BGC-823细胞中表达变化情况,进而初步分析二者在胃癌细胞中的相互关系。采用MTT、划痕、Transwell迁移与侵袭以及Western blot等实验,观察miR-27a-3p对胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响。 结果:Western blot显示B4GALT3在胃癌细胞系中高表达;通过生物信息学方法预测分析与B4GALT3靶向结合且符合条件的miRNAs有7个,分别是:miR-27a,miR-27b,miR-338-3p,miR-125b,miR-28-5p,miR-379,miR-491-5p;结合文献报道,我们选取miR-27a进行后续研究,并发现miR-27a-3p与B4GALT33UTR的213~220位点相结合,结合序列为5-ACUGUGA-3,故选择miR-27a-3p进行研究;Western blot结果显示上调miR-27a-3p后,B4GALT3蛋白表达水平下降,而抑制miR-27a-3p后,B4GALT3蛋白表达增强,P<0.05。MTT实验结果显示:在BGC-823细胞中上调miR-27a-3p后,细胞的增殖活性明显增强,且在72h~96h处作用更明显;相反,抑制miR-27a-3p后,细胞增殖活性明显减弱,P<0.05。划痕实验显示,miR-27a-3p mimic组的迁移距离高于对照组,抑制miR-27a-3p后迁移距离明显低于对照组,P<0.05。Trasnwell迁移实验显示:miR-27a-3p mimic组迁移通过小室的细胞数量明显多于对照组;抑制miR-27a-3p后,迁移细胞数量显著减少,P<0.05。Trasnwell侵袭实验显示:miR-27a-3p mimic组侵袭通过铺有BD基质胶小室的细胞数量多于对照组,而抑制miR-27a-3p后,细胞数量少于对照组,P<0.05。Western blot结果显示:miR-27a-3p mimic能使E-cadherin和Claudin-1表达下调,使Vimentin、Slug和β-catenin表达上调(P<0.05);相反,抑制miR-27a-3p后,E-cadherin和Claudin-1表达上调,而Vimentin、Slug和β-catenin表达下调(P<0.05)。 结论:miR-27a-3p可能通过抑制B4GALT3表达促进BGC-823细胞的增殖活性、迁移和侵袭及EMT进程。