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本研究选取两种代表类型的捕食线虫真菌Arthrobotrysoligospora和Drechslerelladactyloides,应用简并PCR和DNAWalking技术从A.oligospora和D.dactyloides中分别克隆得到Ga的编码全长基因Agal和Dgal,并对这两种捕食线虫真菌和其它类型真菌的Ga基因进行了同源性和系统发育分析比较。为了研究Ga信号传导在捕食线虫真菌中的功能,对Agal和Dgal基因进行了敲除条件的探索。取得以下主要结果:
1.克隆了两种捕食线虫真菌Ga编码基因全长
A.oligosporaGa的编码基因Agal(序列号:FJ230780)全长1507bp,包含6个内含子(长度分别为132bp,67bp,72bp,56bp,61bp,54bp),编码354个氨基酸,其理论分子量和等电点分别是40.69kDa和6.38。
D.dactyloidesGa的编码基因Dgal(序列号:FJ230781)全长1420bp,包含6个内含子(长度分别为62bp,62bp,60bp,56bp,54bp,55bp),编码356个氨基酸,其理论分子量和等电点分别是40.84kDa和6.68。
2.分析了Agal和Dgal的同源性及系统发育关系
捕食线虫真菌间Ga编码基因同源性最高,Agal和Dgal的同源性高达86.8%;而Agal与其它真菌Ga基因的最高同源性为来自ParacoccidioidesbrasiliensisGpa3(序列号:AAT40563),同源性为74.72%;Dgal与BotrytiscinereaBcg3(序列号:BAD93277)的同源性为78.65%。Agal和Dgal属于真菌Ga的第三类群,推测其可能具有激活腺苷酸环化酶的作用。
3.摸索了Agal和Dgal的敲除条件
运用农杆菌介导转化技术(AgrobacteriumtumefaciensmediatetransformatioN,AtMT)和CaCl2/聚乙二醇法对Agal和Dgal的敲除条件进行了摸索。
论文的创新性:
1.克隆了捕食线虫真菌A.oligospora和D.dactyloides的Ga的编码基因Agal、Dgal,在捕食线虫真菌领域属首次报道。
2.首次对捕食线虫真菌与其它类型真菌的Ga编码基因进行了较为全面的同源性比较和系统发育分析,确定了捕食线虫真菌Ga编码基因的所属类群及其潜在功能。