论文部分内容阅读
本研究选取两种代表类型的捕食线虫真菌Arthrobotrysoligospora和Drechslerelladactyloides，应用简并PCR和DNAWalking技术从A.oligospora和D.dactyloides中分别克隆得到Ga的编码全长基因Agal和Dgal，并对这两种捕食线虫真菌和其它类型真菌的Ga基因进行了同源性和系统发育分析比较。为了研究Ga信号传导在捕食线虫真菌中的功能，对Agal和Dgal基因进行了敲除条件的探索。取得以下主要结果：
1.克隆了两种捕食线虫真菌Ga编码基因全长
A.oligosporaGa的编码基因Agal（序列号：FJ230780）全长1507bp，包含6个内含子（长度分别为132bp，67bp，72bp，56bp，61bp，54bp），编码354个氨基酸，其理论分子量和等电点分别是40.69kDa和6.38。
D.dactyloidesGa的编码基因Dgal（序列号：FJ230781）全长1420bp，包含6个内含子（长度分别为62bp，62bp，60bp，56bp，54bp，55bp），编码356个氨基酸，其理论分子量和等电点分别是40.84kDa和6.68。
2.分析了Agal和Dgal的同源性及系统发育关系
捕食线虫真菌间Ga编码基因同源性最高，Agal和Dgal的同源性高达86.8％；而Agal与其它真菌Ga基因的最高同源性为来自ParacoccidioidesbrasiliensisGpa3（序列号：AAT40563），同源性为74.72％；Dgal与BotrytiscinereaBcg3（序列号：BAD93277）的同源性为78.65％。Agal和Dgal属于真菌Ga的第三类群，推测其可能具有激活腺苷酸环化酶的作用。
3.摸索了Agal和Dgal的敲除条件
运用农杆菌介导转化技术（AgrobacteriumtumefaciensmediatetransformatioN,AtMT）和CaCl2/聚乙二醇法对Agal和Dgal的敲除条件进行了摸索。
论文的创新性：
1.克隆了捕食线虫真菌A.oligospora和D.dactyloides的Ga的编码基因Agal、Dgal，在捕食线虫真菌领域属首次报道。
2.首次对捕食线虫真菌与其它类型真菌的Ga编码基因进行了较为全面的同源性比较和系统发育分析，确定了捕食线虫真菌Ga编码基因的所属类群及其潜在功能。