Efp介导的槲皮素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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目的:心肌梗死等心血管疾病发病率逐年增高,并常伴有突发性,而缺血性再灌注损伤则是阻碍临床治疗的主要原因之一。槲皮素是一种黄酮类植物雌性激素,苹果,红酒,洋葱,绿茶等日常用品中均有发现。有研究表明[1,2],槲皮素能够对抗血栓形成,并通过减少氧自由基形成,抑制细胞凋亡,降低线粒体膜电位发挥抗心肌缺血再灌注损伤保护作用,但具体作用机制尚不明确。本实验采用H9C2心肌细胞,构建缺氧/复氧(A/R)损伤模型,以深入探讨槲皮素抗心肌缺氧复氧损伤保护作用的机制,以及与雌激素环指蛋白(Efp)之间的关系。方法:选取形态良好的H9C2心肌细胞,常规培养后随机分成5组:(1)正常对照组(Control);(2)缺氧/复氧组(A/R);(3)槲皮素+A/R组(Quercetin+A/R);(4)槲皮素+阴性对照+A/R组(Quercetin+NC+A/R);(5)槲皮素+Efp-siRNA+A/R组(Quercetin+Efp-siRNA+A/R)。本实验中采用Western blotting(免疫印迹)法测定Efp蛋白表达水平;采用MTT比色法检测5组实验组细胞的存活率;采用酶联免疫法,测定处理后5组实验组细胞的MDA、GSH-Px、LDH以及SOD水平;采用流式细胞仪测定5组实验组细胞的细胞凋亡水平以及细胞内线粒体膜电位(Δψm)稳定性、活性氧(ROS)含量。结果:1.Que预处理的H9C2心肌细胞中Efp表达水平,与缺氧复氧损伤组比较,Efp表达水平与预处理槲皮素的剂量呈依赖性上调(P<0.01);2.Que预处理H9C2心肌细胞组与缺氧复氧损伤组比较,细胞存活率显著上升,LDH释放减少(P<0.01);3.Que预处理H9C2心肌细胞组与缺氧复氧损伤组比较,细胞内MDA减少,SOD与GSH-Px抗氧化性水平增加(P<0.01);4.Que预处理H9C2心肌细胞组与缺氧复氧损伤组比较,细胞内ROS含量明显减少,Δψm稳定性增加,细胞凋亡程度减弱;5.Que预处理H9C2心肌细胞组加入特异性的Efp-siRNA腺病毒后,与Que预处理H9C2心肌细胞组比较,Que抗心肌缺氧复氧损伤保护作用显著减弱(P<0.01)。结论:槲皮素抗心肌缺氧复氧(A/R)损伤的保护作用至少部分地依赖于Efp蛋白表达程度的增加。
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