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妊娠期间,胎儿作为同种半异体移植物是如何逃逸母体排斥的问题一直是生殖免疫领域中的未解之谜。滋养层细胞是在母胎界面上惟一与母体直接接触的细胞,其在免疫逃逸过程中发挥着重要作用。它们不表达经典的人类白细胞I和II类抗原,特异性地表达非经典人类白细胞抗原-G、-E和-F。它们独特的表达特征使其在对胎儿的免疫耐受中发挥重要的作用。目前,有关HLA-G的研究比较广泛,而对HLA-E和-F的表达与机制的研究尚缺乏。本研究将探讨HLA-E在正常妊娠过程以及妊娠期疾病(妊娠期高血压疾病和滋养细胞疾病)中的表达和定位,以期了解HLA-E在正常妊娠和病理性妊娠中的作用机制。成功的妊娠需要来自母体和胎儿的一系列的免疫调节因子,孕酮是一个重要的免疫调节剂,妊娠时母体血液中孕酮浓度显著增高,其在免疫系统发挥许多效应,例如:刺激抑制性T细胞增殖,阻断细胞毒性T细胞活性,降低自然杀伤细胞活性,诱导淋巴细胞蛋白,调节细胞因子反应,刺激子宫内膜的生长和分化以允许胎盘植入,抑制子宫收缩,具有使母体对胚胎产生免疫耐受,减少母体对滋养层细胞的排斥,保护胚胎的作用。然而,孕酮在妊娠期间发挥免疫耐受作用的机制仍不明确,有关于孕酮对HLA-G的调控的研究报道,因此我们大胆设想孕酮的一个作用机制可能是通过调控非经典人类白细胞抗原的表达来实现的。为了证实我们的设想,本研究在体外培养绒毛外滋养层细胞,并加以孕酮干预,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法来检测孕酮对体外培养的绒毛外滋养层细胞HLA-G、-E和-F基因转录的影响,以期了解非经典人类白细胞抗原和孕酮在维持母胎耐受中的作用机制。第一部分人类白细胞抗原E在正常妊娠与病理性妊娠中的表达实验一人类白细胞抗原E在正常妊娠与妊娠期高血压疾病中的表达目的探讨人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-E在正常妊娠与妊娠期高血压疾病中的表达与意义。方法取早、中、晚期正常妊娠及妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期胎盘各6例,应用免疫组化法分别检测HLA-E在其绒毛及蜕膜上的表达。结果在正常妊娠各个时期,各种类型的滋养细胞(包括细胞滋养细胞和合体滋养细胞)上HLA-E的表达均较弱;在蜕膜上,HLA-E强表达于侵入蜕膜的绒毛外滋养层细胞(extravillous cytotrophoblasts,EVCTs)和腺上皮细胞,且自妊娠中期至晚期表达逐渐增强。而在妊娠期高血压疾病中,HLA-E在绒毛和蜕膜组织的表达均低于正常妊娠。结论HLA-E的表达在正常妊娠早期可能与胚胎植入有关,在中、晚期参与妊娠的维持;其在妊娠期高血压疾病中的低表达可能与该疾病的发生有关。实验二人类白细胞抗原E在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中的表达目的探讨HLA-E蛋白在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达及意义。方法应用免疫组化法分别检测HLA-E蛋白在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达。结果在早孕绒毛组织中,HLA-E蛋白主要表达于EVCTs,在其他滋养层细胞弱表达;HLA-E蛋白在早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达依次增强,其差异有统计学意义(P<0.001)。结论HLA-E蛋白的表达可能与滋养细胞的侵袭行为有关,在滋养细胞肿瘤的侵袭中有一定作用。第二部分孕酮对非经典人类白细胞抗原调控的机制研究实验一人早孕期绒毛外细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定目的建立一种简便、实用的原代人早孕EVCTs的分离和纯化方法。方法收集人早孕期绒毛组织,采用胰蛋白酶消化、淋巴细胞分离液分离纯化,并进行培养的方法,倒置显微镜下观察EVCTs的形态学特征;免疫细胞化学鉴定细胞来源及纯度。结果胰蛋白酶消化和淋巴细胞分离液分离的得到的EVCTs,阳性率可达90%,可表达特异性HLA-G。结论采用胰蛋白酶消化和淋巴细胞分离液分离的方法,可简单、快捷地获得高纯度人早孕期EVCTs。实验二孕酮对非经典人类白细胞抗原调控的机制研究目的探讨孕酮对人早孕滋养层细胞HLA-G、-E、-F基因转录的调控作用。方法选取正常妊娠6~9周的人绒毛标本,经胰蛋白酶消化、体外培养和纯化获得EVCTs,采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测孕酮、孕酮+米非司酮对体外培养的EVCTs HLA-G、-E、-F基因转录的影响。结果添加100ng/ml孕酮的EVCTs其HLA-G、-E、-F mRNA水平显著增高(P<0.05),而这种作用可以被共培养的相应浓度的孕酮+米非司酮完全抑制。结论孕酮对体外培养的早期人滋养细胞HLA-G、-E、-F的转录具有明显的上调作用。