论文部分内容阅读
本实验的研究目的是从本实验室早期合成的一系列新的二烯丙基三硫醚(DATS)衍生物中筛选出能够有效抑制肿瘤细胞增殖的化合物，初步探讨其可能的作用机制，为研发具有自主知识产权的DATS衍生物抗肿瘤新药奠定基础。
本实验以体外培养的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞为研究对象，选取其中五种不饱和的DATS衍生物：二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚、二(3-甲基-2-丁烯基)三硫醚、二(5-己烯基)三硫醚，采用MTT法检测研究DATS及其衍生物对PC-3细胞增殖抑制作用。采用Hochest33342荧光染色及荧光显微镜观察经DATS及其衍生物作用后，人前列腺癌PC-3细胞中凋亡细胞的形态学变化；采用DNA Ladder实验进一步验证DATS及其衍生物可诱导PC-3细胞凋亡；并采用Annexin/PI双染，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。选取二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚三种化合物进行抗肿瘤机制的研究，采用PI单染流式细胞仪分析细胞周期的分布；Western blot检测caspase-3及细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。
不同浓度DATS及其衍生物处理PC-3细胞24h、48h后，均可抑制PC-3细胞体外增殖，抑制率呈明显的剂量、时间依赖性；其中二(2-甲基-2-丙烯基)的增殖抑制作用最好，三硫醚二(3-丁烯基)三硫醚和二(4-戊烯基)三硫醚两种衍生物的增殖抑制作用与DATS相当，而二(3-甲基-2-丁烯基)三硫醚和二(5-己烯基)三硫醚的的增殖抑制作用相比于DATS有所减弱。用DATS及其衍生物作用后，Hochest33342染色用荧光显微镜观察PC-3细胞中出现细胞核固缩、染色质聚集及核裂解等典型凋亡细胞形态改变；DNA琼脂糖凝胶电泳可以观察到明显的阶梯状条带DNA Ladder，说明此时细胞发生了凋亡，并且处在晚期凋亡阶段。Annexin V/PI双染流式结果表明PC-3细胞经过DATS及其衍生物作用后，细胞凋亡率与对照组比较有显著性升高，证实DATS及其衍生物能诱导PC-3细胞凋亡。流式细胞周期检测显示，DATS及其DATS及二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚三种衍生物可诱导PC-3细胞发生在G2/M期阻滞，Go/G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，S期细胞无明显变化。Western blot结果表明DATS及二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚三种衍生物能刺激caspase-3的分解，及抑制Bcl-2蛋白的表达且上调Bax蛋白表达。
以上结果说明，DATS衍生物能抑制PC-3细胞增殖，并诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期。其作用机制可能与caspase-3切割数量的增加，抑凋亡因子Bcl-2表达的下调，促凋亡因子Bax表达的上调有关。