目的通过临床研究、功能研究及分子机制研究,评估miR-181b在胆管癌中的诊断和预后价值、分析其对胆管癌进展的影响、探索其生物学功能发挥涉及的分子机制。方法1、使用miRNA芯片技术分析胆管癌中miRNAs差异表达谱,q RT-PCR分析miR-181b在胆管癌组织和癌旁组织中表达量;2、回顾性分析189例胆管癌患者和68例健康志愿者的临床资料,q RT-PCR分析miR-181b在胆管癌患者和健康对照血清中表达量差异、q RT-PCR分析miR-181b在胆管癌患者癌组织和癌旁组织中表达量差异、卡方检验分析胆管癌患者癌组织和血清中miR-181b表达水平与患者临床病理学特征的相关性、建立ROC曲线评估血清miR-181b在胆管癌患者中的诊断价值、使用Kaplan-Meier方法建立了患者的生存曲线、COX回归分析miR-181b在预测胆管癌患者预后中的独立性;3、培养三个胆管癌细胞系HUCCT1,HUH28、RBE和正常细胞系HIBEC,使用q RT-PCR检测细胞中miR-181b的表达水平;向HUCCT1和HUH28两株胆管癌细胞系中转染miR-181b mimic（模拟物）,miR-181b inhibitor（抑制物）以及对应的阴性对照mimic NC,inhibitor NC,q RT-PCR验证转染后miR-181b表达水平;使用MTT法分析经转染调控后miR-181b表达量对癌细胞增殖能力的影响、使用Transwell法分析经转染调控后miR-181b表达量对癌细胞迁移和侵袭能力的影响;在小鼠实验中,分析miR-181b对小鼠肿瘤组织大小和肿瘤的影响。4、使用Target Scan（http://www.targetscan.org/vert＿72/）平台预测miR-181b的靶基因,使用荧光素酶报告实验对预测到的靶基因进行验证,进一步在调控miR-181b的胆管癌细胞中检测PARK2的m RNA表达水平,验证胆管癌中miR-181b靶向调控PARK2的假设,并且分析miR-181b表达量与PTEN/PI3K/AKT信号通路蛋白的关系。结果1、miRNA芯片技术分析发现胆管癌中miR-181b上调倍数最高（Fold change=2.248）且miR-181b在癌组织中的表达量明显高于对应的癌旁组织（P<0.01,差异有统计学意义）;2、回顾性分析189例胆管癌患者和68例健康志愿者的临床资料,miR-181b在胆管癌患者血清中表达量高于健康对照（P<0.01,差异有统计学意义）、miR-181b在胆管癌患者癌组织中表达量高于对应癌旁组织（P<0.01,差异有统计学意义）、血清miR-181b表达量与患者的淋巴结转移和TNM分期显著相关（P<0.05,差异有统计学意义）、癌组织中miR-181b表达量患者淋巴结转移及TNM分期显著相关（P<0.01,差异有统计学意义）、通过建立ROC曲线发现血清miR-181b能成为胆管癌早期诊断的新方法（AUC=0.828,灵敏度76.2%,特异性76.5%,诊断截断值0.835）、通过Kaplan-Meier方法分析发现高表达miR-181b的患者其总生存率显著低于低表达miR-181b的患者群体（P<0.01,差异有统计学意义）、COX回归分析发现miR-181b是胆管癌患者的独立预后因子（P<0.01,差异有统计学意义）;3、胆管癌细胞系HUCCT1,HUH28和RBE中miR-181b表达量高于正常细胞系HIBEC（P<0.05,差异有统计学意义）、向HUCCT1和HUH28两株胆管癌细胞系转染miR-181b mimic（模拟物）后miR-181b表达量明显上调（P<0.05,差异有统计学意义）、MTT法分析miR-181b表达量上调后癌细胞的增殖能力也明显增强（P<0.05,差异有统计学意义）、Transwell法分析发现i R-181b表达量上调后癌细胞移和侵袭能力明显增强（P<0.05,差异有统计学意义）;miR-181b表达量与小鼠肿瘤组织大小和肿瘤呈正相关（P<0.01,差异有统计学意义）。4、通过生物信息学预测PARK2（parkin RBR E3 ubiquitin protein ligase）可能是潜在miRNA-181b的靶基因,荧光素酶报告实验验证miR-181b可直接结合在PARK2的3’-UTR区域,miR-181b在胆管癌中可显著抑制其靶基因PARK2的表达水平（P<0.05,差异有统计学意义）;miR-181b可以通过抑制PTEN表达和促进PI3K/AKT表达发挥促进胆管癌作用。结论1、miR-181b在胆管癌患者癌组织、血清和细胞系中表达增加,并具有诊断和判断预后价值;2、miR-181b通过靶向PARK2和调节PTEN/PI3K/AKT信号通路来促进细胞生长,迁移和侵袭3、miR-181b/PARK2轴可能是治疗CCA的治疗靶标。