猪细小病毒4型(Porcine Parvovirus Type 4,PPV4)属于细小病毒科,细小病毒亚科,博卡病毒属的新成员,于2009年由美国科学家Cheung等首次检测发现并报道。此后两年,许多科学家又检测到其他型的博卡病毒,但相互间序列相似度很低。目前有关博卡病毒属研究较多的是主要引起人的呼吸道和肠道疾病的人博卡病毒,而关于PPV4的研究还处于起步阶段,目前仅局限于流行病学调查和病毒的近全序列测定分析,而与本研究相关的病毒分离,致病性及组织嗜性等研究仍处于空白。本研究主要对PPV4这一新病毒的诊断方法、流行病学、感染性和功能蛋白表达等做了初步研究。首先,本研究对PPV4的分子流行病学进行了较全面的调查:从2006年至2010年,共检测了931份病料,检出阳性样本131份,总阳性率为14.07%。分析检测结果显示,2006-2008年期间, PPV4尚未在我国出现。从2009年开始,在中国部分猪群检到PPV4,但检出率极低,仅为3.52%。但从2010年开始,PPV4的检出阳性率逐年升高,2010年的检测率为27%,到2011年则高达31%。进一步分析数据显示,PPV4具有一定的区域性:检出率最高的为天津、湖北和江苏等省。冬季和春季是PPV4的高发季节(总46%)。同时,数据显示,PPV4在种猪身上的带毒率较高(80%)。但是,非常奇怪的现象是,PPV4在健康猪中的阳性率要高于发病猪(34.3%VS3.1%),并且,PPV4一般不与其他常见猪病共同出现,检出PPV4阳性的猪都很少检出其他常见猪病病原。通过克隆并测定了7个PPV4的全基因组序列,分析显示PPV4的基因组结构和博卡病毒属其他病毒相吻合,都存在3个开放阅读框(ORFs),即ORF1(NS),ORF2(VP),ORF3(NP)。PPV4全长与美国获得的PPV4近全长基本相一致,都是首尾连接的结构,但不同的毒株在连接部分存在不同的缺失。序列进化分析显示PPV4与博卡病毒属的其他病毒以及与其他病毒的进化距离都相当远。PPV4动物攻毒实验结果显示PPV4在实验猪体内存在明显的消长曲线,在接毒8天之时感染猪体内的PPV4 DNA拷贝数达到高峰,随后开始平缓的下降。组织嗜性分析显示PPV4几乎可以感染猪的所有器官,但在肠道以及泌尿道内的含量要明显高于其他器官。病理解剖结果也佐证了这一结果:感染猪的肠道肠系膜淋巴结明显肿大。将感染后转阳的试验猪的血清过滤,超速离心富集后,进行电镜观察,20000倍视野下可见类似细小病毒大小的病毒粒子。对PPV4的各个开放阅读框进行真核表达,以验证用于检测PPV4抗体的蛋白,研究发现PPV4的三个ORF只有ORF1(非结构蛋白,NS)所表达出的蛋白可以跟PPV4阳性血清反应,在进行NS蛋白原核表达之时发现表达出的蛋白要远小于NS实际编码蛋白的大小,仅约26KD。最终纯化获得的PPV4NS蛋白,将可用于以后临床样品血清中PPV4抗体监测。