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首先,我们采用浓度递增法刺激人胃癌细胞MGC803,建立了人胃癌体外耐药细胞模型MGC803/5-FU,并初步探讨了MGC803和MGC803/5-FU的生物学性质及耐药株MGC803/5-FU的耐药机制。在这部分的研究中,我们以人胃癌细胞MGC803为亲本细胞株,以化疗药物5-氟尿嘧啶低浓度持续刺激,并逐渐加大刺激浓度,建立人胃癌体外耐药细胞模型MGC803/5-FU。耐药细胞株建立后,我们采用CCK8法检测了亲本细胞株及耐药细胞株对5-氟尿嘧啶、顺铂、紫杉醇、阿霉素的耐药性及耐药细胞株撤药6个月内的耐药稳定性。同时,5-氟尿嘧啶作用亲本细胞与耐药细胞后,经DAPI染色和Annexin V/PI染色进一步验证耐药株MGC803/5-FU对5-FU的耐药性;然后,我们通过PI染色、平板克隆和绘制生长曲线等检测了MGC803和MGC803/5-FU生物学性质的差异。最后,通过Western blot检测亲本细胞和耐药细胞P-gp、TS、β-catenin等蛋白表达量的差异,分析可能的耐药机制。经过8个月的诱导,成功建立了人胃癌体外耐药细胞模型MGC803/5-FU,耐药指数为13.02,但交叉耐药现象不明显;同时,耐药细胞株撤药六个月内耐药指数能够保持在9到13之间,耐药稳定性较好。5-氟尿嘧啶作用后,相同浓度下,耐药细胞的凋亡率明显低于亲本细胞。与亲本细胞相比,耐药细胞G0/G1期比例增加,S期比例减少;耐药细胞生长速度减慢,群体倍增时间增大,克隆形成率降低。耐药细胞中TS蛋白表达量增加,同时Wnt/β-catenin通路相关蛋白发生改变。在耐药模型的基础上,我们接着研究了新型甾体联苯类化合物ZYL-263对胃癌细胞MGC803及其耐药细胞MGC803/5-FU的抗肿瘤活性及其机制。我们采用CCK8法和平板克隆法检测化合物ZYL-263对MGC803及MGC803/5-FU细胞生长增殖的影响。DAPI染色和Annexin V/PI染色检测ZYL-263对两株细胞细胞凋亡的影响;同时,DCFH-DA染色检测ZYL-263对两株细胞活性氧的影响。最后,ZYL-263作用两株细胞后,Western blot检测Bcl-2、Bax、Total-Caspase-7、Cleaved-Caspase-7、Total-PARP-1、Cleaved-PARP-1、TS等蛋白表达量的变化。结果显示,ZYL-263对MGC803及MGC803/5-FU有较好的生长抑制作用,同时MGC803/5-FU的IC50低于其对MGC803的的IC50;同时,ZYL-263能够抑制两株细胞的克隆形成。ZYL-263能够使两株细胞的细胞核发生皱缩和明显的凋亡,且MGC803/5-FU的凋亡率高于MGC803的凋亡率。ZYL-263作用两株细胞后,胞内活性氧水平明显增高。ZYL-263能够降低两株细胞内的Bcl-2、Total-Caspase-7、Total-PARP-1蛋白表达量,同时增加两株细胞内的Bax、Cleaved-Caspase-7、Cleaved-PARP-1蛋白表达量;另外,ZYL-263显著下调耐药株MGC803/5-FU的TS蛋白表达量,而对MGC803的TS蛋白表达量没有明显影响。综上所述,我们成功建立了稳定的人胃癌体外耐药模型MGC803/5-FU,检测了其相关生物学特性及其可能的耐药机制,为进一步研究耐药相关原因及寻找新型抗肿瘤化合物提供了稳定的体外模型。新型化合物ZYL-263能够明显促进亲本细胞MGC803及其耐药细胞MGC803/5-FU的凋亡,且对MGC803/5-FU的促凋亡作用更明显,为寻找新型抗肿瘤化合物研究提供一定的思路。