论文部分内容阅读
组织工程是治疗组织、器官功能衰退和缺失的重要技术手段,在医学中的应用日趋广泛,其中支架材料是组织工程技术的重要组成部分。天然细胞外基质作为一种天然支架,生物相容性好,免疫原性低,不易造成种植细胞的排斥与感染,在组织工程研究中具有重大意义。它与被替代组织的细胞外基质(ECM)成分与结构基本相同。本研究探讨了制备源于猪不同部位的膜状、管状和实质脏器的ECM作为支架进行移植替代修复人类组织、器官缺损的可行性。我们采取了酶解脱细胞的方法制备了猪不同部位的膜状、管状和实质脏器的ECM,结果证明能有效脱除干净细胞,降低了ECM的免疫原性。天然细胞外基质虽然免疫原性低,生物相容性好,但其机械强度和降解性能常不足以满足临床需要。对天然细胞外基质进行改性,可以有效改善机械强度及其在体内的降解性能,同时使其更有利于细胞的粘附、铺展、生长、增殖、功能表达,使细胞和分子产生响应的特异性识别位点和特异性基因的表达。本研究分别通过戊二醛、N,N环己基碳化二亚胺、1.2.7.8—双环氧辛烷和京尼平,对猪组织的膜状、管状和实质脏器的ECM进行改性。我们发现四种交联剂在交联效果方面有所差异。比较而言,京尼平在这四种交联剂中,对于ECM缝线拉伸断裂强度、抗降解性能、细胞毒性和溶血性方面的改善效果最好,其中:(1)缝线拉伸断裂强度:京尼平交联的ECM>戊二醛交联的ECM>1.2.7.8—双环氧辛烷交联的ECM>N,N环己基碳化二亚胺交联的ECM;(2)抗降解程度:京尼平交联的ECM>1.2.7.8—双环氧辛烷交联的ECM>N,N-环己基碳化二亚胺交联的ECM>戊二醛交联的ECM;(3)细胞毒性:戊二醛交联的ECM细胞毒性最大,N,N环己基碳化二亚胺、1.2.7.8—双环氧辛烷和京尼平交联的ECM细胞毒性较小;(4)溶血性:戊二醛和1.2.7.8—双环氧辛烷交联的ECM溶血性较大,N,N环己基碳化二亚胺和京尼平交联的ECM溶血性较小。进而,我们采用京尼平对脱细胞后的猪的真皮、胸主动脉、膀胱、心包、尿道、瓣膜、腹膜和输尿管进行交联改性,探讨制备工艺,测定交联改性后产物的性能。改性后膜状、管状和实质脏器ECM在性能上存在一定差异,但缝线拉伸断裂强度和降解性能均得到改善,溶血性都能符合国家相关标准。我们将上皮细胞接种于以上八种京尼平交联的ECM上,观察发现细胞在ECM支架材料上能够良好生长。初步验证了本实验研究中获得的改性后的天然细胞外基质作为组织工程化支架应用于组织的修复与重建的可行性,为组织工程化替代物的深入研究打下了基础。