论文部分内容阅读
本文以斜纹夜蛾(Spodoptera litura Fab．)离体细胞系S1—1细胞为供试材料，运用MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜、western blot等技术研究了印楝素等10种化合物对S1—1细胞增殖、细胞周期分布、胞内活性氧含量(ROS)、细胞核分裂和凋亡形态、以及细胞周期和凋亡相关蛋白表达量的影响，初步探讨了印楝素阻滞细胞周期进程，诱导细胞凋亡，最终导致细胞增殖抑制的机理。主要研究结果如下：
1.利用MTT法测定了印楝素等9种植物源化合物对S1—1细胞增长抑制作用，结果表明印楝素、喜树碱、鱼藤酮、烟碱4种化合物对S1—1细胞具有较明显的抑制效果，印楝素1.0μg/ml、喜树碱1.0μM、鱼藤酮0.75μg/ml处理48h后细胞增殖抑制率分别为41.00％、30.72％和63.02％，而烟碱20μg/ml处理48h后细胞增殖抑制率26％。
2.运用流式细胞仪测定结果表明印楝素、喜树碱和鱼藤酮能够影响细胞周期分布，阻滞细胞周期进程。印楝素0.1—1.0μ9/ml处理后，细胞周期各时相的变化趋势表现为G0/G1期、S期细胞比例显著下降，G2/M期细胞比例显著上升。印楝素0.1μg/ml处理后12h，G0/G1期细胞比例即为1.54％，S期细胞比例下降为22.47％，均显著低于CK；而G2/M期细胞比例为75.99％，显著高于CK。以0.1—1.0μg/ml处理后48h，S期细胞比例均为0，而G2/M期细胞比例则均超过96％。喜树碱各浓度处理后，细胞周期各时相变化趋势与印楝素相类似。
3.通过流式细胞仪测定结果表明印楝素、喜树碱可显著影响ROS含量。印楝素和喜树碱处理后S1—1细胞ROS含量随处理时间的增加，表现先升高，后降低的趋势。印楝素0.1、0.5μg/ml处理S1—1细胞后，ROS水平迅速上升，到12h时达到最大值，平均荧光强度(MIF)是CK的1.70倍和2.12倍；印楝素1.0μg/ml处理后8h ROS含量最高，MIF比CK升高101.79％。喜树碱0.1、0.5、1.0μM分别在处理后4、8、2h，胞内DCF(2，7—二氯荧光素)的MIF达到最大值，比CK升高72.41％、75％和73.13％，随后降低，分别在处理后24、12、12h，与CK差异不显著。
4.运用荧光显微技术研究印楝素、喜树碱对S1—1细胞核的形态和分裂相的影响。结果显示，印楝素0.1—1.0μg/ml处理后4—12h，细胞分裂相增多，细胞核出现分裂中期和分裂后期形态异常，出现双核和多核细胞，处理24h后，出现典型的凋亡形态，如：核固缩，染色质边集，核裂解以及出现凋亡小体等，随后凋亡细胞开始增多。喜树碱0.1—1.0μM处理后，S1—1细胞出现染色质缢缩，边集成“新月”状等典型的凋亡前期形态特征，同时出现巨核(二核)细胞，而且两者的数目均随着处理时间的延长而不断增加。
5.蛋白印迹Western blot结果显示，印楝素0.5μg/ml和喜树碱0.5μM处理后p53蛋白相对表达量上升，分别在24h和12h时达到最大值，随后有所下降；周期蛋白B1的表达量则随着处理时间的推移而不断下降，而周期蛋白D1相对表达量在处理后均出现先上升，后下降的趋势，印楝素和喜树碱分别在处理后8h和4h时达最大值。
结合研究结果和文献，本文探讨了天然源化合物干扰昆虫细胞增殖、细胞周期、ROS含量等与诱导细胞凋亡的关系，以期为深入研究天然产物的细胞毒理机制、设计基于细胞周期调控的新型昆虫生长发育调节剂提供有益参考。