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第一部分单宁酸铁包裹的载全氟己烷纳米粒的制备及表征检测目的1.制备一种单宁酸铁(Tannic acid,TA)包裹的载全氟己烷(perfluorohexane,PFH)纳米粒(The nanoparticles containing polylactic acid shell,Fe III-tannic acid and perfluorohexane);2.完成对FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒理化性质的检测。方法1.首先采用双乳化法,制备载PFH的PLGA纳米粒,再用单宁酸铁(TA-FeIII)包裹PFH/PLGA纳米粒,制备FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒。2.光学显微镜观察FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒的大小、分散性,马尔文粒径分析仪对FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒的粒径、分布情况、电位相关表征进行检查。透射电子显微镜对比分析PLGA/PFH纳米粒和FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒的结构。结果1,首先采用双乳化法法成功制备出FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒,FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒溶于去离子水呈黑紫色。2,光镜下观察FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒呈球形。马尔文粒径分析仪检测其粒径为(229.4±37.94)nm,聚合物分散指数(Pd I:0.326),电位为(-17.6±7.64)m V,纳米粒的大小均匀,分散性好。透射电镜下观察PLGA/PFH纳米粒呈黑色球形而FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒呈中间灰白色外周黑色的球形,分散性好。结论1.成功制备出单宁酸铁包裹的载全氟己烷(FeⅢTA/PLGA/PFH)纳米粒;2.检测了FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒的基本理化性质,其呈球形,大小均匀,分散性好。第二部单宁酸铁包裹的载全氟己烷纳米粒的体外光热效应相变情况与双模态成像效果的评估目的1.探索Fe IIITA/PLGA/PFH纳米粒体外光热效应。2.评估FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体外相变情况及光声/超声双模态显像能力。方法1.把FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒按不同浓度分组,各组经660nm(0.5W)激光辐照5min,以PBS为空白对照组。热成像仪检测各组的温度变化。将相同浓度的FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒用不同激光瓦数激光辐照5min,以PBS为空白对照组。热成像仪检测各组的温度变化。2.将不同浓度的FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒采用光声成像仪检测各组光声信号,并分析各组信号强度。3.采用660nm激光(0.5W)分别辐照不同浓度FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒悬液5分钟以PBS为空白对照组,超声诊断仪分析显像效果并测量超声信号灰度值。660nm激光(0.5W)辐照浓度为0.25g/L的FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒5min,每隔1min检测一次,以PBS为空白对照组,于超声诊断仪分析显像效果,并测量超声B模式和造影模式信号灰度值,B模式是用亮度调制方式来显示回波强弱的方式。同时于光镜下观察相变情况。结果1.光热效应定量分析,激光辐照后第5min时FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒的温度和纳米粒浓度呈正相关,同时观察到温度上升的速度和幅度与纳米粒浓度相关,浓度越高温度上升越快、越高,并定量分析其5min时温度和浓度的相关性,结果显示两者呈正相关(R2=0.8486,p<0.05),而对照组的温度未见升高。以不同功率(0-1W)激光辐照浓度为0.25g/L的FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒5min,观察到温度上升的速度和幅度与激光辐照功率相关,功率越高温度上升越快、越高。观察各组至5min的光热图,并定量分析其5min时温度和功率的相关性2.分析纳米浓度和光声信号强度关系,发现光声信号强度随纳米粒浓度增加而增加,两者关系呈正相关(R2=0.9978,P<0.05)。3.评估纳米浓度和超声信号强度关系,经激光辐照,B模式和造影(Contrast-enhanced ultrasound,CEUS)模式都可观察到明显的信号增强。定量分析信号强度变化,纳米粒浓度越高,B模式信号越强,两者关系呈正相关(R2=0.8465,P<0.05),同时造影模式信号也越强,且两者关系呈正相关(R2=0.9363,P<0.05)。定量分析激光辐照时长和超声信号强度关系,随着时间增加,B模式和造影模式都可观察到信号明显增强,定量分析信号强度变化,随着纳米粒浓度的增加,B模式信号越强,两者关系呈正相关(R2=0.991,P<0.05)。同时造影模式信号也越强,两者关系呈正相关(R2=0.992,P<0.05)。在光镜下观察纳米粒的相变情况,随着辐照时间延长,相变纳米粒增多,光镜下可见大量微泡。结论1.FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒具有良好的光热效应。2.FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒具有良好的相变能力和光声/超声双模态成像能力。第三部分单宁酸铁包裹的载全氟己烷纳米粒的体内分布及代谢与双模态成像效果的评估目的评价FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体内分布及代谢情况评价FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体内光声/超声双模态显像能力。方法1.构建Y79裸鼠模型:将处于对数期生长的人Y79细胞用胰蛋白酶消化后,离心洗涤(1000rpm×5 min)。用生理盐水重悬Y79细胞,以1×106细胞/100μL的标准接种于裸鼠的右侧后背皮下。裸鼠饲养于标准IVC系统中。定时观察裸鼠的生活状况及瘤情况,待瘤块长到约0.5cm3开始后续试验研究2.多功能活体荧光仪检测FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体内分布情况实验。随机将裸鼠分类两组采用尾静脉注射方式注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒和PBS;异氟烷气体麻醉裸鼠,将其置于多功能活体荧光仪中分别在不同时间检测活体荧光成像(2h,4h,6h,8h,12h,24h,48h);24h后猝死部分裸鼠解剖分离裸鼠脑、心脏、肺脏、肾脏、肝脏和肿瘤再次在活体荧光仪成像3.FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体内光声显像将裸鼠随机分为两组(n=3),随后采用腹腔注射的方式麻醉裸鼠(1%戊巴比妥钠溶液0.1 mL/20g),将其置于光声成像仪中,观察肿瘤区域纳米粒注射前的情况并采图。分别经裸鼠尾静脉注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒和PBS,于不同时间点,观察采集肿瘤部位的光声成像图(2h,4h,8h,12h,24h,48h)拷贝图像,并用光声仪自带软件进行数据分析。4 FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体内超声显像将荷瘤裸鼠随机分为两组(n=3),分别经裸鼠尾静脉注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体和PBS。PBS对照组激光辐照前和激光连续辐照肿瘤区域5分钟(2 W/cm2)后分别采集B模式以及造影模式的超声信号。实验组在注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒体后24h,分别采集激光连续辐照肿瘤区域5分钟(2 W/cm2)前后的B模式以及造影模式的超声信号。结果1.注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒后分别记录(2,4,6,8,12,24,48h)荧光信号,发现肿瘤部位荧光信号强度逐渐增高,到48小时时仍可检测到荧光信号。2.注射FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒后2小时,肿瘤区域的光声信号明显增强并且光声信号强度明显高于对照组(P<0.05)。注射后24小时光声信号强度达到最大值。到注射后48小时后,光声信号值下降。3.在造影模式和B模式下PBS对照组经红外激光辐照肿瘤部位前后超声信号组间无明显差异(P>0.05)。FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒注射后24小时经过激光辐照,肿瘤部位在造影模式和B模式下的超声信号明显增强(P<0.05)。结论1.FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒能积聚在肿瘤区域,达峰时间为24h,2.FeⅢTA/PLGA/PFH纳米粒具有良好的体内光声/超声成像能力。