目前,抗癌及抗炎药物在临床上应用的一个主要缺陷,在于其对于肿瘤治疗及炎症治疗的特异性和对正常细胞所产生的负作用。人类PLA2G12A基因广泛的存在于人的各类组织中,其催化作用依赖于钙离子水平及组氨酸的活性部位。PLA2G12A的酶活性相对较低,能够参与脂类代谢过程,对炎症与肿瘤的发生发展具有一定的影响。本研究利用了分子生物学的相关技术制备了人类重组蛋白PLA2G12A,为进一步研究PLA2G12A的生物学功能及其应用奠定了一定的基础。首先,根据GeneBank中登记的序列号,通过设计特异性引物,利用PCR技术扩增得到了全长为570bp的PLA2G12A基因片段,通过酶切,酶连等方法将此片段克隆到大肠杆菌表达载体pET30a中,构建了重组质粒表达载体pET30a-PLA2G12A。经过测序和序列比对,与GeneBank数据库中的序列完全一致,重组质粒表达载体构建成功。将重组质粒表达载体pET30a-PLA2G12A转入大肠杆菌表达菌BL21中进行表达,得到经IPTG诱导表达后的目的蛋白。经SDS-PAGE电泳检测可知,目的蛋白主要以包涵体的形式进行胞内表达。利用亲和层析的方法,对目的蛋白进行纯化,通过Bradford法分析纯化后的蛋白,所测得的蛋白最终浓度为0.113mg/mLo经Western Blot分析,证实所表达的蛋白即为所需的目的蛋白PLA2G12A。因此,人类重组蛋白PLA2G12A制备成功。